测定中性粒细胞吞噬的操作方法
测定中性粒细胞吞噬的操作方法
1. 菌液的制备 将白色葡萄球菌接种于中,放37℃温箱内培养12h左右;置水浴中加热100℃ 10min杀死细菌,用无菌生理盐水稀释成6×108 细菌/ml备用;
2. 用血红蛋白吸管吸取受试者耳垂或指血40μl,立即加入盛有20μl肝素(浓度为20U/ml)的洁净凹玻片的凹孔内,轻轻搅动混匀, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混匀。然后置入铺有湿纱布的有盖容器内(此容器先放37℃温箱中预温),在37℃温箱中作用30min,其间每隔10min摇匀一次;
3. 作用完毕,取1小滴混合液置于洁净无油污的载玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,硷性美蓝液染2~3min,置油镜下观察。随机计数100个中性粒细胞,分别记录发生吞噬和未吞噬的白细胞数,对有吞噬作用的白细胞,应同时记录所吞噬的细菌数;