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细胞的裂解程度如何判段

发布日期:2020-03-12 10:20:31

RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则需通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,如NF-κB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

组织裂解:先将组织剪成细小的碎片,之后利用匀浆器或超声破碎的方法,镜检显示细胞破碎率大于90%,同时组织已经完全裂解,没有明显的小组织块。之后按照细胞裂解的步骤进行裂解,裂解程度的判断标准与细胞裂解一致。

细胞裂解:加入RIPA后,充分裂解的细胞,没有细胞沉淀,很粘稠。如果像浑浊的水一样粘性很小则可能是裂解液得量加太多导致的;相反,如果RIPA裂解液后出现胶状物体,离心不能沉淀则可能是蛋白太多,RIPA裂解液加入的量太少导致的。




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