植物硝态氮试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
测定原理：
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。
自备仪器和用品：
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加1.2mL浓硫酸充分溶解。
试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1支，4℃保存。
样本处理
按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min，待冷却后于25℃，12000g离心15min，取上清待测。（深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取）
测定操作表
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2、 在EP管中如下表加样
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空白管
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测定管
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样本（μL）
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10
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蒸馏水（μL）
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10
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试剂一（μL）
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20
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20
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充分混匀，25℃静置30min
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试剂二（μL）
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475
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475
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混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，转移200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管
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注意：空白管只需测定一次。
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V样总）
=64.1×（△A-0.0073）÷W
V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V样总）
=128.2×（△A-0.0073）÷W
V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
植物硝态氮试剂盒说明书注意事项
1. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
2. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
3. 最低检出限为2μg/g。
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