TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂）

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

商品属性：

TRzol LS试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层、中间层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。无论是人、动物、植物还是细菌，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol LS 试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol 抽提的总 RNA 能够避免DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I 来处理抽提的总RNA。

注意事项：
1.从少量的组织(1~10mg)或细胞(10 2-10 4 个)中分离RNA 样品：往组织或细胞中加 入 800µl TRzol。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙醇沉 淀 RNA 之前，加入 5~10μg 无 RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度 在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。Glycogen 会留在水样层中 并和 RNA 共析出。在浓缩到 4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会 抑制 PCR。 

2.在匀浆化后和加入氯仿之前，样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将 RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。 

3.用 TRzol LS 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通 风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，室温保持在 15~30℃的条件下。

自备试剂： 

氯仿 、 异丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（将水加入 无 RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压灭菌）。0.5% SDS 溶液(RNase-Free water 配制)（可选）。

操作步骤： 

1.样品预处理 a.生物液体 每0.25ml液体样品(血清，血浆等等)加入0.75ml TRzol LS，用加样枪吹打液体样品 几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×10 6个细胞至少加入0.75ml TRzol LS。对于含有高 污染物样品如全血样品，可以用灭菌水按照1：1比例稀释一倍后开始提取。TRzol LS 和液体样品的终体积比总是3：1。 b.组织 用glass或强力匀浆器搅匀组织样品，每50~100mg组织或者0.25ml组织悬液加 0.75ml的TRzol LS。一般50~100mg组织体积都要小于0.25ml，如果组织样品的体积小 于0.25ml，加入灭菌水将组织样品体积调整到0.25ml以保证体积比例是3：1。 c.单层生长的细胞 直接往直径3.5 cm的培养板中加入0.3ml-0.4ml的TRzol LS溶解细胞，用加样枪吹打 帮助充分裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRzol LS 量 （每10cm2加0.3-0.4ml）。不需要往裂解物里面加水，因为培养板中附着残留的培养液 已经充分稀释了TRzol LS 。 d.悬浮生长的细胞 通过离心来沉淀细胞。在TRzol LS试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每 5~10×10 6的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×10 7细菌加0.75ml的TRzol LS。和步骤 b 一样用灭菌水调节样品体积到0.25ml。在加入TRzol LS前应避免洗涤细胞，因为那 样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。 2.分离阶段 将匀浆样品在15-30°C条件下孵育5min以使核蛋白体完全分解。每0.75ml TRzol LS 加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒并将其在室温下孵育2~15 min。 在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心15 min。离心后混合物分成三层： 下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。 水样层的容量大约为所加TRzol LS 容量的70%。 

2.RNA 的沉淀 将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层和中间层同 样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。每0.75ml TRzol LS对应0.5ml 异丙醇。将混合的样品在15-30°C条件下孵育10min并在2~8°C下以不超过12,000×g的离 心力高速冷冻离心10 min。RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后会形成一胶状片状 沉淀附着于试管壁和管底。 

3.RNA 的漂洗 移去上层悬液。用75%的乙醇(RNase-Free water配制)洗涤RNA沉淀一次，每0.75ml 的TRzol LS至少加1ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°C下以不超过7,500×g的 离心力高速冷冻离心5 min。 

4.RNA 的再溶解 室温简单干燥 RNA 沉淀，不要在真空管里离心干燥 RNA。尤为重要的是，不能让 RNA 沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的 RNA 样品其 OD260 /OD280 比值<1.6 。用移液管分几次移取 RNase-Free water 或 0.5%SDS 溶液 (RNase-Free water 配制)来溶解RNA（如果RNA 以后要用于酶切反应时，避免使用SDS。） RNA 还能被 100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在-70°C。