Bst 3.0 DNA/RNA polymerase

产品编号： P-PR1119

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P-PR1119-1600U		1600U	¥1060.80	登录查看

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Bst 3.0 DNA/RNA polymerase	1600U	P-PR1119

储存条件：-20℃保存
产品简介：
Bst 3.0 DNA/RNA 聚合酶是嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）DNA 聚合酶 I 大片段（Bst LF）经过基因突变改造
过的聚合酶。该酶具有 5’-3’的 DNA 聚合酶活性和链置换活性，无 5’-3’核酸外切酶活性。与 Bst 2.0 DNA/RNA 聚合酶相比，Bst 3.0DNA/RNA 聚合酶的热稳定性、扩增速度、链置换速度和逆转录活性有了进一步的提升。适合高温快速 LAMP 类型的等温扩增实验。
活性单位：一个活力单位（1 U）即在 65°C 条件下，30 分钟内催化 25 nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
质量控制：SDS-PAGE 检测纯度大于 99%，经检测无核酸外切酶，内切酶活性，无细菌基因组 DNA 残留。通过各种模板进行等温扩增测试。室温存放一周，无明显活性改变。
应用范围：
1.DNA 或 RNA 为模板的 LAMP 等温扩增。
2.适用于链置换方法扩增 DNA。
3.高 GC 结构 DNA 的测序和微量 DNA 模板快速测序。
10×Bst Buffer：200 mM Tris-HCl，100 mM (NH4)2SO4，500 mM KCl，80mM MgSO4，1% Tween® 20
pH 8.8@ 25°C
储存缓冲液：10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1% Triton
® X-100，pH 7.5 @ 25°C
使用方法：

1. 按以下组分配制 LAMP 等温扩增反应液，建立反应体系。

2. 混匀，离心数秒，置于控温设备中 65℃反应 30-60min。
3. 反应结束后 85℃，5min 失活聚合酶。电泳检测或肉眼观察并记录结果。
注意：
1.Primer Mix(10×)配制方法，用灭菌水将引物全部溶解至浓度为 100µM 的储存液。取一干净离心管，先加 56 μL 灭菌水，然后取FIP 和 BIP 引物各 16 μL, LF 和 LB 各 4 μL，F3/B3 各 2μL，混匀即可。
2.反应体系中可以添加 dUTP 和热敏 UDG 酶。经测试占比 50%的 dUTP（0.7mM）完全不影响 Bst 酶活性。热敏 UDG 酶用量可按供应商的推荐用量和方法添加。
3.可使用带热盖加热的 PCR 仪以及金属加热块或恒温水浴作为控温设备。无热盖加热装置，需要在反应管中添加一滴石蜡油，防止反应液蒸发。
4.可以在反应体系中添加适当浓度的 SYTO®-9、EvaGreen
® 、SYBR
® Green I 等荧光染料分子，用于实时荧光等温扩增。
5.为防止扩增产物污染造成假阳性结果，最好在其它房间对阳性样本进行 2%以上浓度的琼脂糖凝胶电泳检测。

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