公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
商品属性:
产品名称
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规格
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货号
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qPCR MasterMix(Probe) 探针法qPCR荧光定量Mix
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1ml
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P-PR1139
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qPCR MasterMix(Probe) 探针法qPCR荧光定量Mix
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1ml×5
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P-PR1139
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储存条件:-20°C 保存。
注意:仅供科研使用。
产品简介:
qPCR MasterMix(Probe)结合了最新的缓冲体系技术和抗体修饰的热启动 Taq 酶,确保快速、高特异性和高灵敏度的实时荧光
PCR 检测,适用于所有实时荧光定量PCR 仪。本试剂适用于探针(TaqMan®, Scorpions® and molecular beacon)检测。
qPCR MasterMix(Probe)包含所有实时荧光定量 PCR 的必要组分,包括 dNTPs、稳定剂和增强剂,非常方便使用。操作时,实
验人员只需添加引物,模板和探针。
灵敏度 and Ct 值:
当用我们公司的产品和其它同类产品比较时,我们强烈推荐梯度稀释扩增试验,直到不能检出的模板浓度,这是检测灵敏度
的唯一方法。早期的 Ct 值不能代表好的灵敏度,只能说明扩增速度快。
PCR 扩增条件:
以下的程序适合长度 200bp 以内产物的扩增,当然也可以根据不同情况适当调整。
*2min for cDNA, 5min for genomic DNA
**两个探针以上的多重荧光检测需要达到 50s 反应结束后,根据仪器情况可选择熔解曲线分析。
PCR优化提示:
引物和探针: 以下的建议是基于TaqMan探针的实时荧光PCR检测,其它类型探针请参考相关资料。任何实时荧光PCR检测的特异
性和扩增效率都与特定序列、引物探针浓度、和扩增子长度有关。我们强烈推荐考虑以下几点:
• 使用引物设计软件,比如 Primer3 或者 visual OMPTM (http://dnasoftware.com/)。引物的Tm值一般在60°C左右;
• 最佳的扩增子长度在 80-200bp,最好不要超过300bp;
• 最终引物浓度400nM 适合大部分实时荧光PCR检测, 如需测试最佳引物浓度,我们建议梯度范围是0.2-1μM。同时引物浓度要
相同。
• 最终探针浓度100nM 适合大部分实时荧光PCR检测,我们建议探针的浓度跟引物浓度相比,至少低两倍。
注意:在多重实时荧光PCR检测中,探针浓度超过100nM 会导致荧光信号交叉污染。