公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！
商品属性：
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产品名称
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规格
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货号
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Dpn I
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250U*2
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P-PR1234
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识别序列：
储运温度：-20℃保存。
来 源：dpnI质粒的重组大肠杆菌
单位定义：在37°C条件下，50μl 反应体系中，一小时内消化 1 µg 的甲基化的 pBR322 DNA 。
失活条件：80℃热处理 20 分钟，可使酶失活。
般酶切反应体系：
甲基化影响：
能够切断腺嘌呤甲基化的 GmATC 序列；不能切断非甲基化的 GATC序列。能够切断来源于大肠杆菌E.coli（dam+）的 DNA；
PCR 产物不受 dam 甲基化的影响。
酶存储缓冲液：
10 mM Tris-HCl，300mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，500μg/ml BSA，50% Glycerol，pH 7.4
10×DpnⅠ缓冲液：330mM TrisHAc，10mM Mg(Ac)2，660mM KAC，5mM DTT，pH7.9
限制性内切酶DpnⅠ在定点突变中的应用：
限制性内切酶DpnⅠ可识别GmATC序列并在甲基化的腺嘌呤处切割。大肠杆菌由于甲基化修饰限制系统，内源性的dam甲基化
酶可将质粒DNA甲基化。从大肠杆菌中提取出来的质粒DNA的GATC序列中的腺嘌呤已被甲基化，因此可以被DpnⅠ识别并切断。
耐热DNA聚合酶扩增出来的DNA未被甲基化，因此不能被DpnⅠ识别。以甲基化质粒DNA为模板的PCR体系中，可通过DpnⅠ的消化特点将大肠杆菌来源的质粒DNA除掉，消除原始模板对实验的影响。
⑴DpnⅠ处理质粒DNA后的转化效率
从DH5α（dam+）及JM110（dam-）中抽提的1μg 的pUC19 DNA（pUC19（dam+）、pUC19（dam-）），在50μl 反应体系中，37℃DpnⅠ处理1小时，标准方法测定细菌转化效率。 用DpnⅠ处理pUC19（dam+）DNA时的转化效率。1 Unit处理1小时后降低到1/500，20 Units处理后1小时转化效率降低到1/10000。用DpnⅠ处理pUC19（dam-）时，未发现转化效率明显下降。
⑵DpnⅠ酶在多种高保真酶的缓冲液中活性检测
选取Pfu polymerase buffer，KOD polymerase buffer，Phusion polymerase buffer，Xerox polymerase buffer，UltraPfu polymerasebuffer，Q5 polymerase buffer，FastPfu polymerase buffer，PrimerStart polymerase buffer等多个高保真酶个缓冲液为DpnⅠ的缓冲液，pUC19（dam+）DNA为酶切底物，经检测DpnⅠ酶切DNA的成功率均为80%以上。
DpnⅠ在定点突变中的消化步骤
⑴将定点突变后的 PCR 扩增产物 10μl 进行 1%琼脂糖电泳。看到有预期大小的条带，再进行 DpnⅠ酶消化操作。
⑵取 10-20μl PCR 产物置于一个 PCR 管中，加入 1μl 的 DpnⅠ酶，置于 37℃恒温箱中消化 1-2 小时。
⑶消化完毕后，取 1μl，2μl 或 5μl 消化产物进行标准的大肠杆菌转化操作程序。一般用 2μl 的消化产物足够。
⑷次日长出细菌克隆后，挑取 3-4 个单克隆菌落摇菌用于测序分析。
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