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SUMO 蛋白酶

P-PR1347
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 SUMO 蛋白酶

 1000U

P-PR1347

 

描述:SUMO 蛋白酶,也称为 UIP 蛋白酶(分子量 26kD), 是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶。SUMO 蛋白酶以一 种非常特异的方式切割蛋白,它特异性识别 UBL 蛋白的三 级结构-SUMO,而不是氨基酸序列,故该蛋白酶可以切割 重组融合蛋白的 SUMO。切割的最佳温度为 30°C,该酶作 用温度和 PH 范围(pH7-9)都比较广泛。酶切后,可通过 Ni-NTA Resin 亲和纯化很容易地将 SUMO 去除。该 SUMO 蛋白酶是自 E.coli 表达经亲和纯化的重组蛋白酶,含有 His 标签。 

活性定义:在 1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl,pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,30°C 反应 1h,剪切>85%的 100pmol 底物,所需要的酶量定义为一个活性单位。
储存:SUMO 蛋白酶置于-20°C 可保存 2 年。
操作方法
1. 在 EP 管中配制如下反应体系
融合蛋白 20-200 μg(0.2-2nmol)
10X SUMO Buffer 5 μl
SUMO 蛋白酶 (10 U/μl) 1 μl
ddH2O Upto 50 μl
2. 混匀上述体系后于 30°C 孵育 1-16 小时。若蛋白为热不稳定性,请在 4°C 孵育较长时间或增加酶的用量。
3. 取样品进行 SDS-PAGE 分析。
注意事项
为达到最好的酶切效果,请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白,SUMO 蛋白酶所需 NaCl 的浓度不同的蛋白情况会有所差别,可根据实际情况在0~300mM 之间调节 NaCl 的浓度以达到最佳的效果。


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