公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！
商品属性：
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产品名称 |
规格 |
货号 |
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T4 DNA Ligase（T4连接酶） |
500U |
P-PR1231 |
产品概述：
在有 Mg2+和 ATP 存在的条件下，T4 DNA Ligase 能催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯1.在一个无菌0.2ml的PCR管中加入以下成分
用手指轻弹管底混匀各成分，离心数秒使反应混合物沉到管底。
2.反应条件
粘性末端连接：25℃反应5-10分钟。
平末端连接或者一个平端另一个为粘端的连接：25℃反应30-60分钟。
3.连接载体和片段的使用量
连接载体和片段的量一般按照摩尔比 1:3-1:10 进行，片段使用量比载体使用量大，载体和片段的使用量一般为 50-100ng 之间。
例如，3kb 的载体和 0.5kb 片段按摩尔比 1:3 的连接反应。假如使用 50ng 的 3kb 载体，那么 0.5kb 的片段需要量计算方法为：
[（50ng×0.5kb）÷3kb]×(3÷1)=25ng
4.转化
连接完成后，取 5-10μl 连接产物加到合适的感受态细胞中，按照感受态细胞说明书中所叙述的转化步骤进行转化。连接反应结
束后不能转化时，可将连接产物置于-20℃冰箱中保存。
注意事项：
1. 化冻 5×T4 DNA Ligase Buffer 后，需要混匀后再使用。
2. T4 DNA Ligase 最适活性温度为 37℃，但是高温连接形成的连接产物的转化效率会大大降低，所以选用 25℃或 16℃等稍低的连接温度。如果连接产物不用转化且需要高的连接效果，可以在 37℃条件下进行。
3.该酶需要 Mg2+为激活剂，因此螯合 Mg2+的 EDTA 的存在会阻碍连接反应。溶解于高浓度 EDTA 缓冲液的 DNA 需要用灭菌水或TE 缓冲液进行置换。
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