公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！
商品属性：
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产品名称 |
规格 |
货号 |
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2XT4 DNA Ligase |
20 次 |
P-PR1233 |
产品概述：
1.在无菌PCR管中加入以下成分
用手指轻弹管底混匀，离心数秒使反应混合物沉到管底。
2.反应条件
25℃反应5min。片段较长(>2kb)时，连接时间可以适当延长到30min。连接反应结束后不能立即转化时，可将连接产物置于4℃
冰箱保存。
3.连接载体和片段的使用量
连接载体和片段的量一般按照摩尔比 1:3-1:10 进行，载体使用量比片段使用量小。载体和片段的使用量一般为 50-100ng 之间。
例如，3kb 的载体和 0.5kb 片段按摩尔比 1:3 的连接反应。假如使用 50ng 的 3kb 载体，那么 0.5kb 的片段需要量计算方法为：
[(50ng×0.5kb)÷3kb]×(3÷1)=25ng。如果载体和片段的浓度偏小，连接体积可以按比例适当增加。
4.转化
连接完成后，将 5-10μl 连接产物加到合适的感受态细胞中，按照感受态细胞说明书中所叙述的转化步骤进行转化。
注意事项：
1.本试剂在-30℃以下温度长时间保存时可能会产生冻结，但经试验证实，溶解后不影响连接活性，反复冻融多次不影响其活性。
2.T4 DNA ligase 需要 Mg2+为激活剂，因此螯合 Mg2+的 EDTA 的存在会阻碍连接反应。溶解于高浓度 EDTA 缓冲液的 DNA 需要用灭菌水或 TE 缓冲液进行置换。
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