说实在的, 我未曾料到, 有一日自身会身处实验室之中, 凝视着那台PCR仪, 陷入发呆状态。
机器嗡嗡地转着，屏幕上倒计时一秒一秒地跳。
你明白的, 是那种感受——在等待结果之际, 时间仿若被拉扯得漫长了。特别是在着急要得出数据之时, 简直迫切得想要钻进PCR管里去助力其进行扩增的状态。
我并非是那种被称作专家的人, 仅仅是个每日都和核酸有着紧密关联的普通实验工作者。做过数量众多的PCR检测, 涵盖了从传统方式进行的, 到被称为“快速”方式的, 所经历过的失误大概比PCR管的所有数量还要多。
今天就想聊聊快速PCR扩增试剂盒。
速度快就一定好吗？
当然不是。
以前我因贪图便宜, 购买了一款宣称“30分钟就能完成”的试剂盒。那结果是怎样的呢? 非特异性条带多得如同举办了一场电泳涂鸦比赛似的。这让我愤怒不已, 直接将试剂丢进垃圾桶, 并且跟师兄吐槽了足足一下午。
速度快是个好东西，但如果以牺牲特异性为代价，快又有什么用？
你去思考一下, 进行一回PCR, 从样本提取之际开始, 一直到跑胶结束, 所耗费的时间量, 所投入的精力值, 以及试剂方面产生的成本, 全部都付诸其中了。倘若最终数据不符合要求, 那么所有的努力都化为乌有了。
所以，速度和质量，这两样东西，一个都不能少。
怎么判断它“准不准”？
这个问题我问过很多人，也查过很多资料。
实话讲, 扩增效率、特异性、灵敏度, 这三个词听着挺高大上, 实际上落实到实验当中, 就是你能否获取一条干净的主带, 不存在杂带, 不存在拖尾状况, Ct值稳定到让你内心安稳。
我之后更换了好些不同牌子的快速PCR扩增试剂盒, 最终寻觅到一款, 其采用的是那种经过改性处理的聚合酶, 听说那是专门针对快速扩增进行优化调整过的。
第一次用的时候，我心里其实也在打鼓。
结果跑完一看——条带干净得像刚擦过的玻璃。
我当时差点在实验室喊出来。
操作步骤能再简单点吗？
对，我就想问这个。
有一些试剂盒, 其说明书厚得好似一本小说, 步骤繁杂多得能让你对自己如同正在做化学实验产生怀疑。
预使发生变性、进行变性、予以退火、加以延伸, 这些难道还有谁不清楚是否知晓? 关键之处在于, 可不可以直接添加样本、放置到仪器上进行操作、然后离开?
就我所使用的那一款, 它根本无需特意去把退火温度进行优化, 直接照着说明书所推荐的梯度去跑便可以了, 这简直堪称是懒人的福音, 是不是这样呢?
但实事求是来讲, 越是简单的事物, 越能检验技术水平。真正优质的快速 PCR 扩增试剂盒, 它会将繁杂的环节潜藏于背后，让你仅需完成三件事情: 添加模板, 添加引物, 点击运行。
其他的，交给试剂盒自己搞定。
贵不贵？值不值？
做实验的谁不心疼钱呢？
我有一回, 买了一批价格极为低廉的试剂盒, 心里盘算着能节省些经费。而后做出来的数据, 老板瞧了之后径直摇头, 说道要重新再做。
重做意味着什么？
时间, 精力, 还有更多试剂被消耗。最终计算下来, 那批价格低廉的试剂盒反倒致使我花费得更多。
所以呢, 我当下学机灵了。并非越昂贵就越好, 然而那种关乎性价比的事物, 不能够仅仅去看单个的价格, 而是要去考量“每达成一次实验所需要耗费的成本”。
有的快速PCR扩增试剂盒, 一次操作后, 所获结果具备可靠性呀 , 无需再次进行呢 , 如此这般便是节省费用啦。
有没有什么小技巧？
当然有。
譬如有在进行加样这项操作时段内里, 要尽可能地去规避出现气泡这种状况。不要来问询我究竟是出于何种缘由, 曾经有一回我的手部发生摇动的情形, 添加了一个气泡进去, 最终所呈现出来的曲线形态怪异到令人难以理解明白。
并且, 模板的质量是相当关键的。哪怕你试剂盒再好, 然而模板要是降解了, 那它也是没办法挽救你的。
还有就是存在这样一种状况——不要存有贪心的心理。有一些被称作能够实现长片段扩增的快速PCR扩增试剂盒, 然而要是你仅仅是进行一次常规的基因检测, 那么并不必然要去挑战它所具备的极限。保持稳定一些就好, 确保准确一些就可以, 这实际上是比其他任何方面都要强的。
写在最后
做实验这件事，说到底，是个手艺活。
选对了试剂盒，就像手里有了一把好刀，切菜都利索。
我当下正在使用的那个具备快速特性的PCR扩增试剂盒, 已然成为了实验室里的标准配置。它不仅仅体现在速度快这一方面, 而且更是在稳定性上表现突出。每一次完成扩增操作之后, 望着那条清晰可见的主带, 内心便会涌起一种十分踏实的感觉。
要是你同样处于在选择哪一个方面存在着纠结的状况, 那我的建议便是——并非仅仅去查看参数, 并非仅仅去关注价格, 而是寻觅时机去尝试一盒。
实验这东西，试了才知道。
