讲真的, 每一回瞅见实验室采购单里那一连串PCR试剂盒的型号, 我的心里便会猛地一震。 句号。
心疼的并非钱, 而是那些被白白浪费掉的样本, 还有熬到凌晨两点的每一个深夜, 以及打印机吐出来的数目繁杂的一堆堆废数据。你能理解吗? 是那种明明依照说明书一步步去操作, 然而跑出来的条带却如同鬼画符一般, 就连内参都是毫无规则地歪七扭八。
随后, 我才渐渐弄清楚, 挑选PCR试剂盒这个事情, 压根不是价格越贵就越好, 也不是大品牌就一定稳当。
那些所谓“万能”的试剂盒，往往在最关键的地方掉链子。
你们实验室真的需要超灵敏吗？
我见识过好多人, 一上来就紧紧盯着“超灵敏”这三个字, 好像在他们看来, 灵敏度越高, 那论文就能够发表得越好一样, 似的。
但是讲句实在诚恳的话, 你们实验室每日所处理流转的样本, 真的是属于那种拷贝数低至仅有两三个情况的极端性样本类型吗? 要是你所检测分析的样本全部都是平常常规浓度的DNA, 那么那些超具灵敏性的试剂盒额外增添增加的成本耗费以及操作流程的复杂程度, 纯粹完全就是于事无补多余无用的。
就像你非要开辆法拉利去买菜，能跑是能跑，但油钱心疼不？
某些试剂盒宣称可检测出单拷贝, 然而, 当你对普通样本进行检测时, 却由于过度放大了非特异性扩增, 导致背景噪声如同夜市一样嘈杂。最终, 你不得不花费时间重新优化体系, 调整退火温度, 经过一番折腾后又回到了原点。
弄明白你手上样本实际的浓度区间, 接着在这个区间之内挑选那个“恰好能满足使用需求”的试剂盒, 才是真正明智的做法。多了会造成浪费, 少了则无法满足, 唯有恰到好处的才是最为合适的。
操作时间短就一定好吗？
于当下, 实验室之中, 盛行着比拼谁家的试剂盒跑得快速, “30分钟出结果”这般的广告词四处纷飞。
承认这一点, 时间属于生命范畴, 特别是在临床检测情形下, 或者面对大批量筛查状态时, 哪个人不期望快点获取结果后尽快下班呢? 但是存在这样的问题, 有一些被称作“快速试剂盒”的物品, 为了在时间方面进行压缩, 将延伸步骤削减到极致, 或者把聚合酶的活性提升到一种“近似疯狂”的程度。
结果究竟如何呢? 速度倒是快捷了些, 然而产物片段略微长那么一点, 扩增效率便呈现出断崖式的下滑态势。倘若你所检测的靶标恰恰处于200bp范围以内, 这种情况还算尚可, 可一旦超出500bp, 那最终呈现的结果说出来或许你都不会相信, 简直就如同没跑过一样。
曾经, 为了赶项目, 我选用了一个号称能够在20分钟内搞定的试剂盒, 这是我踩过的坑, 跑完之后, 目标条带呈现出若隐若现的状态, 然而, 却无端多出来了一堆非特异性条带, 之后，我更换成了常规的45分钟试剂盒, 问题便全部得到了解决。
因此, 千万别一味只瞅着时间, 去瞧瞧你所设定的目标片段的长度情况, 再去瞅瞅你所拥有的样本的复杂程度如何。有时, 那句强调慢工才能出细活的话语, 在PCR这件事情上, 真的不是那种所谓的心灵鸡汤之类空洞的说法。
保存和运输条件到底重要不重要？
好多人或许会觉得这个问题没什么大不了的, “不就是放置在零下二十摄氏度的环境里, 谁家会没有一台冰箱? ”。
但你可曾思索过, 试剂盒从厂家流转至你手中，其间究竟历经了些什么, 三伏天之际, 快递车内温度可达60℃, 一旦冷链出现断链情况, 那些酶以及缓冲液就好似在高温环境里经历了一番覆灭, 你所拿到的试剂盒, 或许在出厂之时堪称王者, 然而到了你手中却已然沦为青铜。
有一些试剂盒声称“耐高温”, 还表示“可常温运输”, 这的确算是一个卖点。然而你需明白, 所说的“耐高温”, 仅仅是相较于传统试剂来讲的, 并非意味着它能够随意丢在汽车后备箱之中长达一个月。
存在这样的真实情形: 我遇见过好些实验室, 在收到试剂盒之后, 随意地放置在桌子上面, 等到想要使用它的时候, 已然在较为常温的环境下放置了两天时间。最终检验得出的结果犹如心电图那般, 呈现出忽上忽下的状态, 没有一个确切稳定的数值。
若是呈现这般境况, 实验室内置样本的珍贵程度超乎寻常, 或者对于结果稳定性的期望达到了极高的水准, 那种情形下务必得挑选出对运输条件敏感度较低的试剂盒, 而且在收到之后要即刻着手核查冷链记录。千万别让运输这个环节给你整个实验造成了不利影响。
不同品牌之间的差别真有那么大吗？
说实话, 好多试剂盒的核心成分基本类似, 皆是Taq酶、dNTPs、缓冲液这类物品。然而差异常常在细节处呈现——像是酶的保真程度、缓冲液的pH稳定状况、添加剂的配方之类的。
某些品牌极为擅长制作那种“通用型”的试剂盒, 无论什么模板都能够进行扩增, 然而却在任何方面都谈不上精通；另外一些品牌却是专门针对某一种类的样本去做优化处理, 譬如针对血液可直接进行扩增, 针对于植物粗提物也能够直接进行扩增, 像这类试剂盒在特定的场景当中其性能是能够超越通用型的。
你需要慎重思考: 你们实验室最为经常处理的是哪一种类型的样本? 是经过纯化之后的DNA吗? 又或者是临床方面的咽拭子? 亦或是粪便、土壤这类复杂的样本? 要是属于后者, 千万不可以贪图便宜去购买通用型的, 否则后期你所遭遇的各种各样的抑制物问题, 会使你对人生进行怀疑的。
我存在一位朋友, 其所在实验室专门致力于环境微生物方面, 所运用的均是土壤DNA , 起初为贪图便宜购置了一个通用型试剂盒, 然而最终十个样本之中有七个无法扩增出来 , 随后更换成了一个专门着眼于环境样本的试剂盒，可处在相同模板的状况下, 条带竟是亮得犹如灯泡一般。
到底怎么选才算“聪明”？
念叨了这般许多话, 实际上归结起来就是这么一句: 不要被广告宣传语拽着前行, 也别因价格因素而完全否定。
所要你进行的, 是去开启自身的实验记录本, 切实仔细地回想一下过去半年之内, 你们实验室开展PCR操作之际碰到的全部问题, 究竟是灵敏度欠缺, 是扩增效率处于低下水平, 是非特异条带数量众多, 还是重复性存在不足?
先把这些痛点给逐一罗列出来, 接下来再依据这些痛点去对照不同试剂盒的说明。哪一家能够将你的核心痛点给解决掉, 那么哪一家就是你最为合适的选择。
价格, 仅仅只是参考当中的因数里的一个, 并非是唯一的那个, 有的时候, 多花费几百块钱, 所换来的结果是, 少去折腾一整个月份, 这样的一笔账, 不管怎样去计算, 均会是划算的。
即便你察觉到你所面临的痛点根本无法借助试剂盒予以解决, 比如说你的引物设计存在问题, 又或者你的模板提取步骤存有缺陷, 那么无论更换多么昂贵的试剂盒, 都毫无作用。
不要让工具承担责任, 需首先瞧瞧你自身的操作以及设计是不是存在严重瑕疵之处, 这可是有过经验之人所说的实在话语。
行了, 暂且就陈述这么些内容吧。试剂盒这类物品, 倘若选对了那便会成为得力的工具, 要是选错了那可就会变成阻碍前行的事物。在对其进行选型方面多动些心思, 明显要比其他任何事情都更具优势。
