说实话，一开始我也不太懂。
那种情况是, 别人提及“多克隆抗体”“单克隆抗体”, 我听了三年, 可脑子里依旧是一团乱麻。直至有一回, 自己做WB做了一个月, 条带怎么都出不来, 导师递过来一句话: “试试多抗吧, 别再如此执拗了。”。
试了。
然后就…真香。
多克隆抗体到底是个啥？
通俗来讲就是, 将抗原注入到动物的身体当中, 该动物身体内的B细胞会一同对其展开攻击, 各个不同的B细胞会产生不一样的抗体 , 这些混合起来的就是所谓的多克隆抗体了。
不是一种抗体，是一群。像一支杂牌军，各有各的打法。
对于单克隆抗体而言, 它是专门将一个B细胞挑选出来, 使其持续进行无限复制, 最终所产出的抗体仅仅只能够识别一个表位。这就如同特种兵一般, 具备精准的特性。
但问题在于——特种兵有时候太挑了，抗原一变性，它就懵逼了。
为啥WB、IHC更喜欢多抗？
这是让我最开窍的一点。
跑过蛋白胶之后, 经历了变性这一过程, 又经过还原步骤, 还进行了固定处理, 其构象早就发生了改变。单克隆抗体所识别的是特定的三维结构, 一旦发生变性就无法识别出来。而多克隆抗体呢? 它所识别的是多个表位, 对于线性表位也能够识别, 对于构象表位同样能够识别, 总归会有几个能够与之匹配上。
好似你遗失了钥匙, 有一人前来帮你寻觅, 或许仅仅是瞅着桌面瞧。而若是一群人, 那进行地毯式搜寻, 总归会有找着的时候。
所以多抗在WB、IHC里，灵敏度高得不是一点点。
显然，特异程度必定比不上单抗。然而, 在诸多实验当中, 你最先需要达成的乃“将其捕获”, 而非“精确辨认”。
便宜，是真便宜
聊到钱，大家都懂。
单抗运用杂交瘤技术, 需进行筛选、克隆以及扩增操作, 其周期漫长, 设备价格昂贵。多抗又如何呢? 针对兔子、山羊、小鼠, 通过注射抗原, 等待数周时间, 抽取血液, 再进行纯化, 如此便完成了全过程。
成本差异能到十倍甚至更多。
特别是刚刚开始起步的实验室, 因为经费处于紧张状况, 多抗成为了如同能救命一般的存在。曾有一个实验室的师兄讲过这样一番话: “多抗就是身处困境的人的单抗。”这话虽说听起来比较粗俗, 可其中的道理却是没错的。
批次差异，是最头疼的事
说到这里，得讲点真话。
多抗最大的问题不是特异性，是批次差异。
你所使用的那同一兔子, 在首次进行采血之时, 以及第二次采血之际, 其抗体滴度、亲和力都极有可能是不一样的。更不要说去更换成另一只兔子了。所以, 要是去开展大规模的实验, 又或者是想要发表具有高影响因子的文章, 那么多抗是会被审稿人提出质疑的。
解决的办法是什么呢, 是一次性多购买几管, 然后把它们冻起来。可是有些实验室并不这样去做, 如此一来结果就很糟糕了, 没办法重复得出相应的结果。
动物来源，怎么选？
最常见的那个是兔子, 其血清量很大且亲和力高, 小鼠也具备, 然而血清量小, 适宜特殊需求, 山羊产量最为高, 适配工业化生产。
但是存在这样一个冷知识, 兔子的免疫系统针对某些抗原会产生比较强烈的反应, 像磷酸化蛋白就是其中一例, 所以在制作磷酸化抗体的时候, 兔子多抗在敏感度方面相较于小鼠单抗而言, 反而表现得更为突出。
一件事, 是我在进行实验遭遇失败状况之后才发觉的, 在此之前, 一直认定单抗才是最为正宗的做法。
多抗在ELISA里表现如何？
也不错。
基于多抗能够识别多个表位这一情况, 其信号更易于实现放大。然而伴随着的问题同样存在, 即特异性不足, 极易出现交叉反应的状况。所以当运用多抗搭建ELISA之时, 背景或许会偏高, 这就需要对封闭以及洗涤进行优化处理。
假设你所进行的是夹心ELISA, 在一对抗体之中, 当情形为捕获抗体采用多抗, 而检测抗体采用单抗时 , 如此这般的组合事实反倒会呈现出颇为良好的效果。
为什么？多抗捕获能力强，单抗检测特异性好，各取所长。
多抗和单抗能混用吗？
可以，但得小心。
例如WB, 要是你选用了多抗当作一抗, 接着又使用多抗的二抗, 信号就会出现爆炸的情况。然而这不见得就是好事, 说不定非特异条带也会出现爆炸的结果。
更为常见的方案表现为: 一抗采用多抗, 二抗选用单抗或者经过预吸附处理的多抗, 如此这般, 灵敏度得以留存, 背景处于可控状态。
以我的自身经验来讲, 先行运用多抗去摸索条件, 于寻得目标条带之后, 进而更换为单抗实施验证操作, 如此这般效率是最为高的。
多抗的保质期，真的短
经纯化的多抗, 放置于 4 度达半年之久, 其活性就下降了蛮多。若进行冻存状况则会稍好一点, 然反复冻融还是不可行的。需要将其分装, 采用小管形式, 使用一次便丢弃一管。
存在一些厂家, 会添加甘油、BSA用以稳定, 但比较好的办法是, 不要囤积过多。尽管价格较为便宜, 然而囤积到使用不完, 同样属于浪费。
记忆里存在一回, 我将两年之前的兔多抗翻找了出来, 运用了一回，条带淡得仿若幻觉一般, 一天完完全全是白费力气地忙碌啊。
最后想说
多克隆抗体, 它并非是那种能解决各种各样问题的万能药物。不过呢, 它却是在你处于毫无办法 、感觉陷入绝境的时候, 会伸出手来拉你一把的如同老友般的存在。
要是没有它, 好多实验压根就进行不下去。要是没有它, 好多刚着手开展工作的实验室, 全然没办法开展研究。
它粗糙，不完美，批次差异大，但它够用，够敏感，够便宜。
像我的这种, 属于手残党的情况, 是做不了那些折腾起来很费劲的精细单抗筛选的, 因此多抗变成了让我安心的一种存在。
反正实验嘛，能出结果就是好的。
管它黑猫白猫呢。
