说实话，搞细胞培养这事儿，真的挺磨人的。
我目睹过数量众多的人, 满心欢喜地买回来一管细胞系, 小心翼翼实施复苏操作, 头几天留意着其贴壁情况、关注着其分裂状况, 内心满是愉悦。然而最终结果如何呢? 大概到了第三周的时候, 其生长速度突然间就减缓下来。刚开始还认为是培养基存在问题, 更换了好几种, 甚至还怀疑孵箱温度不稳定, 来回折腾了好几回, 最后才发觉——细胞系自身出现了问题。
为什么细胞系会“变老”？
众多人并不清楚, 细胞系并非是永生的。即便你所购买的是稳定转染的株系, 然而每进行一次传代, 它都在持续累积着变化。存在一些变化是肉眼无法察觉的, 只不过分裂速度、形态, 甚至是对药物的反应, 都在悄然发生着偏移。
我结识了一位从事肿瘤研究的男性友人, 他运用Hela细胞开展实验长达半年时间, 然而实验数据却愈发显得怪异, 其重复性糟糕到了极点, 最终他将冻存的第一代细胞进行重新复苏操作, 随后一切又恢复了正常状态, 你说这是不是特别令人恼火呢?
你的细胞系真的没被污染吗？
问出这个问题，好多人会拍着胸脯讲“绝对不会有”。然而事实情况是, 支原体造成的污染极为隐蔽, 培养基不会变得浑浊, 细胞形态也不会出现崩坏, 仅仅是生长着生长着就突然速度变慢了。你觉得是自身操作存在失误, 实际上是肉眼看不见的“小偷”在窃取营养。
有一间实验室做过相关统计, 超过百分之六十的长期进行培养的细胞系, 如果全面检测的话实际上都存在着具备不同程度态势的支原体所造成的污染情况, 只是大部分相关人员没有开展去进行检测的行为, 或者从根本上就不知道还有这样一种需要去做的操作。
传代次数记清楚了吗？
这事呢, 讲出来好似笑话, 可的确是发生过的。有个师姐, 同时养着四株不一样的细胞系, 传代记录本上画得杂乱无章, 最终没法分清哪一株是哪一株了。之后索性把所有疑似混了的冻存管全给扔了, 再重新去买。
故而有时细胞系不长了, 并非它自身不想生长, 而是你将它混同于别的株系了。不同细胞对于消化液的敏感程度并不相同, 倘若胰酶处理过度, 它便会受到损伤；若处理不足, 又无法通过吹打下来。次数增多之后，状态自然而然就变差了。
冻存液配错最致命
新手极易犯下的, 后果最重的, 就是这个。DMSO浓度有误, 或者冻存管降温过度快, 细胞复苏时看似还可以, 培养两天后就开始大面积死亡。你误以为细胞系质量欠佳, 实则是在了你冻存这一步就已然将它“害死”了。
我提议所有的冻存管, 在做标记之时, 别只顾写名字就行。希望把包含所储存的准确日期、代数系列, 就连实际操作的人员都清晰标明确切。真的是这样, 一旦出现一次疏忽模糊, 后续再想弥补就难以挽回了。
血清批次换了也不行
别发笑, 这个事情极其真实。同属一家公司所生产的血清, 不同的批次之间存在着相差悬殊的可能。细胞系对于这一情况格外敏感, 特别是那些一开始就并非特别强健的株系。在更换血清后的头两周, 生长速度出现变缓乃是常见的现象。倘若你刚好遭遇这种情况, 不要急于探寻细胞方面的问题, 首先查看血清批次是否发生了变化。
每次细胞复苏后都在赌运气？
操作流程是固定不变的, 然而细胞系的状态并非如此。存在一些冻存管, 或许已经经历过多次反复冻融的情况了（像冰箱发生故障、拿错取出又重新放回等状况）, 当你进行复苏操作的时候, 认为它状态良好, 可实际上里面的细胞早就破损不堪了。处于这种情形下, 培养不出来是再正常不过的了。
所以, 好多人讲养细胞是一门有着神秘色彩的学问, 实则并非神秘莫测那种样子的, 而是变数众多不已的情形。培养基, 血清, 孵箱, 操作的方式方法, 冻存的条件, 传代的次数等等等等, 哪一个具体的环节要是出现了状况, 最终通通会在细胞系那里体现出来！
最后说句大实话
要是你发觉所养的细胞系近来状态出现异常, 别急于更换方法, 先要回过头审视查看记录, 代数情况如何, 冻存时间是多久, 血清批次怎样, 是否和他人共用培养箱, 诸多时候的问题就潜藏于这般让你觉得“不会出差错”的地方。
别问我怎么知道的，都是泪。
