其实一开始吧，我也没那么在意。
就觉得细胞嘛，养着养着不就活了吗？
那么结果究竟如何, 第一批的原代细胞株, 仅仅三天的时间就几乎全都死掉了。那个时候我目不转睛地盯着显微镜, 看着那些漂浮着的细胞尸体, 我的脑子里仅仅只有这么一句话: 我到底是在哪个地方做错了?
后来才懂，不是错了，是压根没选对。
原代细胞株到底是不是比传代的好？
这个问题的答案，可能跟你想的不太一样。
诸多人士一开始便追逐原代, 认定原代乃是“纯天然”之物, 是“最贴近体内情形”的, 且“数据更为美观”。的确如此, 原代细胞的确留存了更多体内所具有的特征, 不过它的性子也较为暴躁呀。稍有环境不适宜、营养不充足、操作粗糙那么一点儿，它就会对你显露不悦之色——直接以死亡来回应你。
相对而言, 传代细胞确实稳定, 然而有时稳定得好似并非真实之事。你所开展的实验, 得出了一个结论, 将其拿去与体内情况作比较, 结果压根不符。
所以这里就尴尬了：要真实，还是要稳定？
那依我看, 是得分不同方法来做实验。要是你打算去进行机制验证以及探索信号通路, 那么原代细胞可是首选的；要是你仅仅只是开展预实验情况, 还有进行粗筛操作的话, 挑传代细胞做就足够, 可千万别徒然浪费钱财跟精力。
怎么判断这个原代细胞株是不是“好货”？
这个问题，我踩过太多坑了。
最初之际, 我看的是什么? 是图片。那是卖家所给予的图, 细胞呈现出又圆又亮的模样, 瞅着便让人安心。把它买回来后? 根本就不是那般情况。直至后来才晓得, 好多图乃是“特供版”, 你始终养不出那种效果。
那该看什么？我现在的经验是：
瞅一瞅来源情况, 要是讲它是组织直接给消化出来的, 还是经过冻存之后再复苏的那种? 倘若属于后面一种状况的话, 那么你就得去问个明明白白, 关于复苏之后的存活率以及生长曲线方面的问题。好多卖家他们自己本身都未曾进行过测量, 你一旦向他询问这个事儿, 立马就变得支支吾吾起来了。
察看纯度, 原代细胞最惧怕的是什么, 是污染, 并非细菌真菌的那种污染, 而是细胞间的污染, 比如说你所购置的是成纤维细胞, 然而结果里面混杂了一堆平滑肌细胞, 如此一来你的实验数据就全然混乱了。
查看传代稳定性。这点极易被忽视。部分原代细胞标注的是P0 , 等到达你手上时已然是P3了 , 若你再进行两代传代操作 , 它就会老化 , 最终表型完全改变。如此一来 , 你所开展的实验 , 还能够称作原代实验吗?
原代细胞养不活，是不是我的问题？
说真的，如果你养不活，80%不是你的问题。
原代细胞自身本就娇弱细致而珍贵且难以照料, 其生命力与体内所处环境紧密相连、休戚相关, 当你将它从组织之中予以剥离提取出来时, 这情形如同被断绝乳汁供给的孩子, 陡然间被抛掷到全然陌生的环境里, 如此状况下它若能存活于世已然算是自身基因具备强大的适应能力了。
那20%的问题在哪？在操作细节。
拿个例子来讲: 消化所需的时间。当我最初开始培养原代时, 老是会感觉消化得并不够彻底, 于是就会延长一些消化的时长。那么后续出现了什么情况呢? 细胞膜竟然都破裂了, 细胞根本无法附着。之后吸取了教训, 宁愿少消化半分钟, 也绝不多消化一分钟。
还有, 进行换液操作, 原代细胞对于血清的依赖性是非常强的，你换液的频率过于频繁, 它反而承受不了, 就如同人一样, 你持续不断地给他更换新环境, 他同样会产生应激反应, 给予一定时间，让它能够慢慢去适应。
原代细胞实验数据不漂亮，是不是要换？
这个问题，我也纠结过很久。
我曾开展过一回肝原代细胞实验, 对某个基因的表达予以检测, 其结果与文献相比差了两倍。当时我的第一反应是: 完了, 细胞不行。随后我便更换了一批。然而结果依旧是差不多的数据。再换一个供应商? 还是差不多。
后来才明白, 并非是细胞方面出现问题, 而是我忽视了动物自身存在的个体差异, 原代细胞源自活的个体, 每个个体的基因背景并不相同, 其表达量有所波动实在是极为正常现象, 这是毋庸置疑的。
是以你此刻问我, 关于实验数据欠佳是否要更换, 我会讲: 先进行三次确认之举。一次属于偶然状况, 两次是遇合之巧, 三次倘若依旧不可行, 那么再去思索更换之事。切莫一开始就怪罪细胞。
并且, 有的时候你会觉着数据不太美观, 可实际上是你所采用的检测方式存在问题。举例来说, 你进行的是蛋白表达方面的工作, 然而你的抗体压根就没有得到良好的优化, 那么这能怪细胞吗? 不能怪细胞, 就得怪抗体。
到底去哪买原代细胞株比较靠谱？
对于这个状况而言, 实事求是的讲出来, 我并不具备一个标准的答案。这是源于靠不靠谱, 它是由你的需求来决定的。
但有一点我可以肯定：不要只看价格。
咱先说说那价格, 我瞅见过最便宜的, 一管就得几百块, 就算你敢去买, 嘿, 我可还敢用！你琢磨琢磨, 原代细胞从组织采集开始, 接着到分离纯化, 完了再到鉴定, 最后再发货, 这里面哪一个环节它能不要钱? 就几百块能买到的那种, 大概率是所谓的“假原代”——要么就是传了好多好多代的, 要么就是掺和了其他细胞的。
那种价值几千块的物品, 并非必然具备良好品质。存在一些品牌, 其价格超出合理范围, 包装精致美观, 然而质量实则不过如此。
我的当前举措是, 先行购买小包装进行尝试, 千万别直接就去买大包装, 倘若出现不行的状况, 那就全都被浪费掉咯。
之后查看售后情况。存在一些供应商, 当你购买了细胞后, 后续询问问题却根本不回复你。像这类供应商就不要再去考虑了, 原因是饲养原代细胞时总会碰到问题, 而你是需要有人能够帮你解答这些问题的。
最后说点真心话
养原代细胞这事，真的有点像谈恋爱。
刚开始你满怀期待，觉得只要对它好，它就会对你好。
但现实是，它可能完全不领情。你对它越好，它越死给你看。
随后你便会开启对自身的质疑: 是否是自己不契合进行实验? 是否是自身技术存在欠缺? 是否是自己挑选了错误的方向?
其实都不是。
仅仅是你尚未探寻到与它共处的节拍, 每一批次的细胞都存有自身的秉性特点, 你必须要学会去留意它, 适应它的状态, 甚至是对它予以顺从。
别老想着去征服它，你跟细胞的关系，不是征服，是妥协。
一直到现在, 我都没有胆量去讲, 我能够将所有种类的原代细胞都培育得很好。可是起码, 我领悟到了一件事情: 在遭遇失败之际, 不要先考虑去更换细胞, 而是要首先思索自己是不是遗漏了某些要点。
比如温度、比如pH值、比如血清的批次差异。
这些小细节，才是决定成败的关键。
写到最后，我其实也没给出那个“标准答案”。
因为标准答案本来就不存在。
每个实验室、每个实验者、每种细胞，都有自己的特殊性。
你只能在自己踩的坑里，慢慢摸索。
但没关系，所有做科研的人，都是这么过来的。
