上周帮一个师妹看她的细胞。
她所养的细胞是 A549, 属于肺癌上皮细胞, 然而接连两周的时间里, 其生长状态却杂乱无章, 存在部分细胞飘起来的情况, 还有部分贴壁但形态不正常。她为此焦急万分, 在实验室里不停地来回踱步, 嘴里念叨着“我已经更换了三个不同牌子的培养基了！”。
我看了看她的操作记录，问她：“你用的是完全培养基吗？”
她愣了：“不就是DMEM加血清吗？”
嗯…这是大多数人的误区。
到底啥是完全培养基？很多人一开始就理解错了
确切来讲, 上皮细胞完全培养基, 并非仅仅意味着简单地是“基础培养基加上10%的FBS”这种情况。
问题的关键所在是, 即便FBS再好, 它也仅仅只是血清而已, 然而血清之中缺少了许多上皮细胞生长所需要的因子以及激素。
上皮细胞与成纤维细胞存在差异之处 , 成纤维细胞只要给予些许血清便可得意活跃起来 , 然而上皮细胞极为难伺候。
其所需的, 是更多的胰岛素, 用于促进糖利用, 还有转铁蛋白, 负责铁离子运输, 以及氢化可的松, 以维持上皮形态。这类东西, 普通培养基当中并不存在。
于是乎, 你径直采用“基础培养基 + 血清”去培养上皮细胞, 常常会呈现出两种情形: 其一, 混入了成纤维细胞（这是由于成纤维细胞更为坚韧, 在血清之中疯狂生长）；其二, 上皮细胞渐渐地发生变形, 长成了不规则的形状。
为什么我的细胞总是长不好？先看看是不是这3个问题
细胞形态变了
这最常见，也是最容易被忽略的。
例如, 细胞原本呈现出如同鹅卵石、铺路石那般的棱角分明状态, 后来却转变为细长的梭形了。好多人觉得那是“细胞在适应情形”, 实际上并非如此, 而是它正处于退化进程之中。
你看到上皮细胞开始拉长之际, 就得提高警惕了, 此细胞有可能正是朝着间质细胞进行转化, 一旦这个进程启动, 便极难出现逆转的情况, 这时候再添加救助液体就已然为时过晚了。
长得很慢，传代越养越少
换个问题来讲, 每日都进行换液操作, 然而细胞却始终不见生长态势。历经一周时间, 才仅仅长至80%, 可进行传一代操作却还出现了变少的情况。
那便是营养欠缺, 上皮细胞代谢速率较快, 对于某些氨基酸, 特别是谷氨酰胺, 消耗速度极快, 普通培养基之中的谷氨酰胺, 数天便会被消耗殆尽, 然而上皮细胞离开了它, 几乎无法进行分裂。
不少上皮细胞完全培养基之中, 会额外增添L - 谷氨酰胺、或者更具稳定性的丙氨酰谷氨酰胺, 其目的就是为了处理这个问题。
总是污染，总是混进杂细胞
那些在实验室里负责养上皮细胞的人, 最为烦扰的事情便是, 在持续进行培养的过程当中, 突然之间就出现了成纤维细胞。
成纤维细胞相对而言比较耐消化, 在进行传代操作的时候, 上皮细胞还尚未脱落下来, 然而它却已经先脱落下来了。如此经历几代之后, 原本存在的上皮细胞就被“排挤”得没有了。
这存在培养基方面的问题, 好的上皮细胞完全培养基当中会含有具备选择性的成分，这些成分能够对成纤维细胞的生长起到抑制作用, 像某些细胞因子, 又或者是特殊的添加剂组合, 并非仅仅是营养良好就可以达成目的的。
选上皮细胞完全培养基，到底看什么？
讲这么多，核心就三点。
一看有没有上皮细胞专用添加物
请勿仅仅依据名叫“完全培养基”这一名称去判断, 还得审视一下配方层面是否存在胰岛素、转铁蛋白、氢化可的松这类物质 这一方面 有些产品出于成本节省的目的 在其中随意添加了一些所谓的生长因子 便贸然称之为完全 这种培养基对于培养普通细胞而言或许可行 然而针对培养上皮细胞来说 却是远远不足的。
二看能不能保持细胞形态
使用优质培养基培育出的细胞, 其形态理应始终保持稳定, 从第一代直至第十代, 原本呈鹅卵石状的细胞依旧维持鹅卵石形态, 既不被拉长, 也不变形。要是你察觉到细胞形态渐渐发生了改变, 那么即便培养基价格高昂, 也必须予以更换。
三看稳定性
培养基中存在部分, 开封之后两周时间, 活性便产生下降情况。上皮细胞进行培养, 周期较为漫长, 稍微出现变动就是一个月的时长。难道每隔两周就得更换一批全新的吗? 那样成本实在太过惊人。所以需要挑选那些配方具备稳定性, 开封之后也能够维持活性表现的产品。
有一个误区：贵的就一定是好的吗？
不一定。
有些培养基所标注的价格极为昂贵, 然而其配方非常复杂, 复杂到令人畏惧, 包含几十种成分呢, 事实上, 上皮细胞所需要的仅仅是那么几种关键的, 比如胰岛素, 转铁蛋白, 具有氢化可的松, 还有一种是EGF, 也就是表皮生长因子, 这是可选用的, 另外还需要适量的血清或者血清替代物。
好些高价的培养基, 添加了诸多非必需成分, 反倒极易引发批次差异。此外, 太贵的培养基, 倘若仅是“噱头”, 那么养出的细胞, 与普通培养基并无差异。
存在一个些许独特的窍门: 当获取到全新的培养基之后, 首先去培养两代用以观察状况。第一代的情况还算差强人意, 第二代时细胞的状态迈向开始出现下滑态势, 如此一来也就意味着这个培养基在持久稳定性方面存在问题。
我自己用下来的一些心得
养了这么多年细胞，换过的培养基牌子能凑一桌。
有用过较为便宜的, 细胞生长速度缓慢着, 两天就饿得不行了；亦有用过价格较贵的, 心疼肉疼, 并且细胞也好不到哪里去。
后来归纳得出一条规律, 上皮细胞的培养基, 其性价比才属于王道, 并非价格高昂就好, 也并不意味着价格低廉便能够节约费用。
关键之处在于得保持稳定, 这种稳定涵盖两个方面, 一方面是批次方面的稳定, 另一方面是在培养进程当中细胞所处状态的稳定。
你不期望每一批次的培养基都再度去摸索细胞的状态, 也不情愿每隔那么几天就让细胞体验如同乘坐过山车般的起伏变化。
寻觅一个成熟的品牌, 该品牌的用户反馈众多, 且是专门致力于做上皮细胞培养基的, 这样的情况比任何其他情形都要更具优势。
那些从事各类业务的品牌, 培养基常常仅为次要业务线。而那些专门聚焦于细胞培养品类产品的品牌, 对于配方的雕琢会精细许多。
最后想说
养细胞这事，说难不难，说简单也不简单。
不少人认定细胞养得劣是自身操控存问题, 实际上有时确实是培养基没挑对。
尤其是上皮细胞, 它极为敏感, 稍有一点点营养供应未能跟上, 它便会萎靡不振, 一旦有一点刺激超出限度, 它就会发生变异。
赋予其一组恰当的完备培养基, 将其视作“人”来培育, 如此它才会呈现出良好的生长态势展现于你观摩。
别太迷信血清，也别太迷信贵的。合适的，才是最好的。
