坦诚讲, 头一回拿到HUVEC人脐静脉内皮细胞之际, 我的内心也泛起了嘀咕。
这并非是那种, 你于课本之上能见到, 于论文之中会读到, 进而便觉自己已然明白的事物。当真亲自去操作了, 全然不是那般情况。它实在是太过娇贵了。仿若那种, 表面瞧着温顺, 实际上脾气极大的一个人。
我养的第一批HUVEC，三天就死了。
你可晓得, 那种感受, 蛮令人挫败的。培养基进行了三次更换, 然而依旧不行。随后才弄明白, 原来是血清批次存在问题。单单就这么一个微小的细节之处, 却没有任何人向我告知。实验室的师兄说道: “哎, 关于这个, 我还以为你明白。”。
我不知道。
HUVEC为什么这么难搞？
不少人觉得, HUVEC呀, 算得上是内皮细胞, 跟其他细胞没什么多少区别。然而事实并非如此。
它呀, 极其敏感, 只要pH值稍微出现一点偏差, 它便不再生长, 一旦温度波动幅度大那么些许, 它就会开始发生变形, 倘若你稍微再多吹打几下, 它就会给你不好的反应, 直接不贴壁了, 紧接着就飘浮于培养基之中, 处于一种不知死活, 却又并非存活的状态。
那种感觉，就像你小心翼翼地伺候一个不会说话的主子。
并且, HUVEC的生长速率, 迟缓得令人心急如焚。其他细胞巴不得三天就将瓶底铺满, 可它却需要五天乃至七天时间。你原以为它已经死亡, 然而更换一次培养液后, 它又缓缓复苏过来。你认为它已然存活, 可传代后的一两天, 它又开始怠惰消极起来。
你得学会和它相处。
实验做不出来，真的是细胞的问题吗？
这个问题，我问过自己很多遍。
血管生成实验开展之际, 数据老是飘忽不定, 今日状况良好, 明日却欠佳, 同一孔板之中, 这边的人脐静脉血管内皮细胞生长态势颇佳, 那边的却稀疏零落, 究竟是操作层面的问题, 是培养基方面的问题, 抑或是细胞自身本就存在缺陷呢?
之后呢, 有一位年迈的从事血管生物学研究的教授与我讲说, 那样一段话, 我直至如今仍牢记着。他这般说道: “HUVEC并非是机器, 它是具有生命的。”。
对，它是活的。
它, 你绝对不可以如其是一台仪器那般去对待。你必须得对其加以观察。要去看它所呈现出的形态, 还要看它具备的密度, 更得看它是不是存在那些如丝一般细细的、呈突起状的部分。而那些突起, 分明就是其即将开启管状成形的信号的。一旦你错过了, 那实验可就宣告失败了。
存在不少人的实验无法做出来, 根源并非实验在设计方面存在问题, 而是在于没有读懂名为HUVEC的这个“人”。
血管研究为什么绕不开HUVEC？
这个问题，其实挺有意思的。
人脐静脉内皮细胞, 依据其名称可知, 它源自人的脐带, 从伦理层面来讲, 它不存在任何争议, 从生理角度来说, 它与人体内的血管内皮细胞极为相似, 所以若你要对血管生成、血管通透性、炎症反应、血管损伤修复等进行研究, HUVEC几乎是被默认的选项。
你查文献，90%的血管相关体外实验，用的都是它。
然而你可晓得最为讽刺的事情究竟是什么呢, HUVEC属于原代细胞, 存在传代限制, 待到第六代、第七代时, 它便开始出现衰老的情况, 倘若你再打算运用它去开展实验, 那么所得到的结果便不具备可靠性了, 众多的人对此一点都不了解, 依旧在使用第十代、第十二代的HUVEC去进行实验, 随后宣称“这个通路是不成立的”。
不是通路不成立，是你的细胞老了。
怎么判断HUVEC状态好不好？
这事儿，我说三个最简单的点。
瞧外型, 不错的HUVEC呈铺路石模样, 似鹅卵石铺就之路, 一块又一块, 界限明晰。若其变长、拉丝, 抑或变得极胖极大, 那就表明状态不佳了。
留意贴壁比率, 在进行传代操作之后, 正常状态下的HUVEC经过四个小时便差不多贴附好了, 你去查看它, 要是大部分依旧处于飘浮状态, 那就必定存在问题。
来查看增殖的速度, 这相对来说更为专业一些, 你能够测一测它的倍增时间, 正常情况下HUVEC的倍增时间大概是处于24到36小时之间, 要是超过了48小时, 那你就需要去考虑是不是应该更换一批细胞了。
这三个点, 我亲身体验运用过好多回，特别是第一个, 凭借肉眼即可察觉, 极为实用。
买来的HUVEC要不要自己验证？
这是个好问题，也是个容易踩坑的问题。
许许多多人自公司购得HUVEC后, 径直便使用了。然而, 那般公司给予你的, 果真为HUVEC吗? 并非所有公司都靠得住的。某些公司缘于省钱, 给予你的是混入别的细胞的, 又或是传代次数已然颇高的细胞。
所以，验证这件事，别省。
做CD31或者vWF的免疫荧光染色, 这是最为简单的验证方法。HUVEC的身份证是这两个标志物。要是染出来呈现阳性的情况, 那么基本上能够确定是HUVEC。要是染出来为阴性, 那多半是被坑了。
另外, 要进行管状成形实验, 真正的人脐静脉内皮细胞在基质胶上, 几个小时之内就会形成管状结构, 要是它形不成, 或者所形成的结构十分薄弱, 那你就得提高警惕了。
这些验证，花不了多少时间，但能帮你省很多钱和精力。
养HUVEC这个事情，真的急不来
我养HUVEC两年了, 说实话, 直至如今都不敢宣称自己已将它全然掌握了。
它仿若一位脾气怪异的教师, 你压根无从知晓它今儿会给你出哪般题目。不过正是缘着它, 我领悟到一桩事情: 开展实验, 绝不能单单依赖那份protocol, 得凭借观察以及感受。
每个细微之处皆是信号, 培养基呈现的颜色, 细胞所具有的密度, 液体流动时的速度, 进行换液的时间等等这类事物, 唯有你切实地去培养了, 才能够明白, 其他人没有办法传授给你, 文献同样不会对你予以告知。
所以, 要是你此刻正跟HUVEC较着劲, 我可得说, 莫着急。慢慢儿来。
它会长好的。
