在我撰写写这篇相应内容之际 , 身旁放置着一管用了起来进而仅剩一半的通用型名为PCR试剂盒一种物品。
并非是广告。乃是切实真的在使用着。已然使用差不多快两年的时间了, 在这期间更换了三四家品牌的相关产品, 然而最终依旧是再次选用回它了。
有一种感觉, 不知你能否领会——它是这样的, 实验室的角落里, 那些试剂盒被五六个不同厂家的产品堆满, 每一个上面都清清楚楚地标记, 标注了具有高灵敏度, 标明了具备宽适用性, 然而, 这每一次运行之后所显示的结果条带, 呈现出的状态却是千差万别, 有的条带亮得格外刺眼, 有的条带淡得让人极度怀疑人生。面对这般情况, 你不由得开始陷入深深的怀疑, 是不是自己的手部操作出现差错, 是不是吸取样本的吸头没有准确对准, 是不是离心机在今天的运行中处于不佳状态, 心情格外不好。
然后你换了一盒,突然就稳了。
并非是那种有着惊天动地情形的稳定, 而是那种模样, 即你最终能够安心地投身于去做别的实验,不需要再目不转睛地盯着PCR仪上方的进度条而发呆。
它到底能扩什么?
这个问题我问过自己无数遍。
有一款通用型PCR试剂盒, 简单来讲, 就是不管你拿来用于扩增的是什么模板, 包括细菌的、病毒的、植物的, 甚至是有点降解的样本, 它都能够给你扩增出来。它不是那种会挑三拣四, 要求“必须给我纯度高的DNA”的类型, 也不是那种很娇气, 要求“退火温度你必须算准了, 差一度都不行”的种类。
就,它什么都吃。
两年存土之DNA, 我曾试以其量扩之, 浓度低至仪器难测也。持死马当活马医之心上机, 然条带在胶上分明也。吾凝视条带达五分钟, 几欲哭出矣。
那种感受类似这样, 在你处于最为无奈无助之际, 有个人轻轻拍了拍你的肩膀, 而后说道, 没事的, 我将会来处理。
贵不贵?
说句实话,不便宜。
但你要算一笔账。
先前, 我使用那种处于入门级别的混合液, 每一次, 都得亲自添加镁离子, 添加dNTP, 添加缓冲液, 配置一个体系, 得折腾长达十几分钟。并且, 一旦某一个组分的浓度出现不对的情况, 整批的实验都会作废。
毁掉一批, 那可是几十个样本, 几十个样本, 就意味着几百块钱的材料没了, 这还不算你所耗费的时间, 不算你重新采集样本、重新提取DNA所投入的精力。
通用型PCR试剂盒,就一管。
拿出来,加模板,加水,上机。
没了。
你经由各种方式所能节省下来的时间, 足够你去再多完成两篇文章相关的数据整理工作, 足够你较早下班一个半小时时长的时间, 足够减少导师冲着你发出一顿责骂的情况发生。
为什么用的人越来越多?
前阵子去隔壁学院借仪器,看见他们实验室也堆着好几盒。
我问,你们也用这个?
他们讲, 已经更迭了好些个牌子, 最终发觉, 价格高的与价格低的, 实际跑起来好似没多大差异, 出人意料的是那一些处于中等价位的, 稳定性相当出色。
我后来反思了一下这件事。
也不是不可能是我们太过于迷信“贵的便是好的”这种观念了, PCR反应说白了, 它是一种存在着一个酶、一个缓冲液、一个温度之间的三角关系, 在这种情况下, 你花费了十倍的价钱, 所买到的或许是仅有10%的性能提升, 然而, 对于大多数的日常实验来讲, 那10%的边际收益根本派不上用场。
你需要的是稳定,不是极致。
你需要的是“每次都能跑出来”,不是“偶尔跑得特别好”。
有没有用着不爽的地方?
有。
比如说, 它太过“通用”, 针对某些格外挑剔的模板, 其扩增效率并非是最高的。
意味着什么呢? 那便是你去跑一个具备高GC含量的基因, 经由此所扩出来的产量, 或许会比特意设计的高GC扩增酶所产出的要低那么一些。
但那又怎样呢?
并非你在进行单分子检测, 你乃是要查看一下这个基因是否有着表达, 或者去跑一次菌落PCR以对阳性克隆予以验证, 产量稍微低些许, 然而并不妨碍你对结果作出判断, 并且它的容错率极为高, 高至你能够将那些微小的效率差异给忽略掉。
就像你不会因为一辆拖拉机跑不过跑车就不用它来耕地。
你会不会也遇到这些情况?
一整天都在提DNA, 到跑PCR的时候, 心里存在不确定感, 不清楚究竟是不是能够扩出来。
实验做到晚上十一点,结果跑出来没有条带,整个人瘫在椅子上
才更换了一批全新的试剂致使整个实验室的扩增效率发生了改变所以必须重新去优化体系。
导师催结果,但你的PCR就是不亮
我跟你说,这些都太正常了。
对于每一个在进行分子实验的人而言, 这种状态正常至极, 以至于都应当在冰箱之内时常预备着一盒通用型PCR试剂盒, 用来保证检测过程顺顺利利且效果精准无误。
不是因为它多么完美。是因为它真的能帮你兜底。
一个真实的感受
要说我, 实际上并不是特别中意那些被形容得神乎其神、天花乱坠的产品介绍, 诸如所谓的“突破性技术” , 还有那“革命性升级” , 光是听着就让人心里犯嘀咕, 觉得心虚。
此盒试剂盒, 于推出首版模样之际, 就连其包装也稍显土里土气。其说明书乃是以黑白方式进行打印的, 就连一张彩色图片都未曾具备。
但里面的东西真的好用。
你将其放置于冰箱之内达半年之久, 取出后加以使用, 所呈现的依旧是相同的情况。你把它从零下二十度取出, 却忘却放回, 于旁边放置了两个小时, 而后再放入回去, 下次 utilize 时同样不会出现问题。
这种“抗造”的能力,比那些虚头巴脑的技术参数重要一百倍。
最后说一句
我做分子实验快十年了,换过的试剂盒连起来能绕实验室一圈。
到现在最离不开的,还是这盒通用型的。
不是因为它最好,是因为它最稳。
似那始终伫立在你身之后方的旧日友人, 讲不出动听的话语, 然而每当你回转过头, 它皆是在的。
假设当下你正遭受着PCR的困扰, 那么不妨尝试去换一盒通用型的PCR试剂盒。
或许其没办法处理你全部的难题, 可是其起码能够使你少一个致使你崩溃的缘由。
实验本来就很难了,试剂盒就别添乱了。