聚合酶链式反应（PCR）是通过PCR仪，模拟DNA半保留复制，从而体外快速扩增DNA的方式。
PCR扩增后，电泳条带通常包括以下几种类型：
1. 引物带：引物浓度过高或扩增效率不高时会出现引物带，通常表现为发散状。如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。
2. 引物二聚体带：引物二聚体比引物跑得慢一点，条带清晰。如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚体不好分别，建议采用DNA聚丙烯酰胺电泳。
3. 目的扩增产物带：大小与设计大小相同，条带清晰。
4. 非特异扩增产物带：大小与设计大小不相同，条带清晰。一般通过提高复性温度来减少或消除。
5. 模板DNA带：模板浓度过高时可能出现。如果是基因组DNA为模板，条带可能会很乱且较大。
在进行PCR扩增时，可能会遇到多上述种条带问题，包括非特异性扩增、引物二聚体、条带弥散和条带大小与理论不符等。以下是这些问题的常见原因及解决方案：
一. 非特异性扩增
原因：
6. 引物问题：引物聚合形成二聚体，或引物与目的DNA序列非特异性互补。
7. 模板问题：模板不纯、降解或量过大。
8. Mg2+浓度：浓度过高导致非特异性扩增。
9. 反应程序：循环次数过多、退火温度过低或时间过短。
解决方案：
1. 优化引物设计，减少引物添加量，必要时重新设计引物。
2. 检查并优化模板的纯度和浓度。
3. 调整Mg2+浓度，避免过高。
4. 控制PCR循环次数，一般在30次左右。
5. 提高退火温度，减少变性与延伸时间。
二. 引物二聚体
原因：
引物设计不当，导致引物自身形成二聚体。
解决方案：
1. 重新设计引物，避免形成二聚体结构。
2. 降低引物浓度，减少引物的非特异性结合。
三. 条带弥散
原因：
1. 酶量过高：过量的酶会导致非特异性扩增。
2. dNTP浓度过高：高浓度的dNTP可能促进非特异性扩增。
3. MgCl2浓度过高：Mg2+浓度过高同样会导致非特异性扩增。
4. 模板量过多：过多的模板可能导致非特异性扩增。
解决方案：
1. 适当减少酶量，调整dNTP和MgCl2的浓度。
2. 控制模板量，避免过多。
3. 减少PCR循环次数，优化反应条件。
四. 条带大小与理论不符
原因：
1. 污染：实验操作中的污染可能导致扩增产物大小不一致。
2. 模板或引物错误：使用了错误的模板或引物。
解决方案：
1. 确保实验操作的洁净，使用全新的试剂和枪头。
2. 检查并确认模板和引物的正确性。
五. 阴性对照出现条带
原因：
试剂污染：试剂、枪头或工作台的污染。
解决方案：
使用全新的试剂和枪头，清洁工作台。
六. 条带模糊
原因：
1. DNA降解：DNA模板的降解导致条带模糊。
2. 电泳条件：电泳缓冲液陈旧或电泳条件不合适。
3. PCR非特异性扩增：PCR反应中的非特异性扩增。
4. 加样不当：样品在加样时操作不当，导致样品飘出样孔。
解决方案：
1. 确保DNA模板的质量，避免降解。
2. 更新电泳缓冲液，优化电泳条件。
3. 使用特异性较高的引物，减少非特异性扩增。
4. 谨慎操作，避免加样时的失误。
通过上述措施，可以有效解决PCR扩增中的条带问题，确保实验结果的准确性和可靠性。
