要判断兔ELISA试剂盒的变异系数(CV)是否达标,需通过以下关键指标和实验方法进行综合评估:
一、板内重复性(批内变异)
同一批次内对同一样本重复检测(建议≥5次),计算变异系数(CV%)。优质试剂盒要求板内CV<5%。例如,Invitrogen VCAM-1试剂盒通过14次重复检测验证了其重现性。
二、板间重复性(批间变异)
不同批次试剂盒检测同一样本,CV应<10%。需严格控制加样量、温育时间、洗板次数等操作参数以减少误差。
三、多维度验证
1、阴性/阳性对照:每板需设置阴性和弱阳性对照,确保信号阈值(如阳性OD>1.5,空白OD<0.3)。
2、稀释线性:样本回收率需在80%-120%范围内。
3、稳定性测试:长期保存后(如15天)重复检测,结果需与初始数据一致。
四、操作建议
预实验:使用已知浓度标准品验证标曲线性(R²≥0.99)。
自动化设备:采用自动洗板机并增加30秒浸泡步骤,提升精度。
五、CV值标准参考
1、理想情况:板内CV<10%,板间CV<15%。
2、可接受范围:板内CV<15%,板间CV<20%。
3、CV过高(>20%):数据不可靠,需排查加样误差、孵育条件不一致等问题。
通过上述方法可全面评估试剂盒的重复性,确保实验数据可靠性。