新闻中心

ELISA实验中，试剂交叉污染可能导致假阳性、背景值过高或重复性差等问题，影响结果准确性。检测污染的核心在于识别非特异性信号的来源，尤其是来自试剂本身的系统性干扰。通过合理的质控设计与环境监控，可有效发现并定位污染源。

检测ELISA试剂交叉污染的主要方法

一、分区操作与耗材管理

将实验室划分为独立区域（如试剂准备区、样本处理区、检测区），各区域使用专用移液器、吸头和容器，防止试剂混用。

建议对设备进行颜色编码区分，避免混淆。

所有枪头盒应避免长时间敞开暴露，开封后标注使用日期。

关键试剂（如标准品、酶结合物）应分装为单次用量，避免反复开盖导致污染或活性下降。

二、规范加样与移液技术

每次加样必须更换带滤芯吸头，即使是同一样本也需一孔一换，防止液体残留传播。

推荐使用反向移液法处理高浓度试剂或粘稠样本，减少气溶胶产生。

加样时枪头不应接触孔壁或已有液体，避免交叉沾染。

三、洗涤过程优化控制

洗涤是去除未结合物质、降低背景的关键步骤。

手工洗板时，应确保洗涤液充分浸润孔内，每次洗涤后用力拍干于无菌滤纸上，特别注意清除孔缘残留。

使用自动洗板机时需定期校准喷液压力和管路清洁，使用前后用去离子水冲洗至少3次，防止试剂残留累积。

洗涤次数可适当增加（如比说明书多一次），尤其在加酶标抗体后，以防信号扩散。

四、环境与设备监控

实验前开启超净台紫外照射15–30分钟灭菌，保持环境密闭。

操作涉及涡旋震荡等易产生气溶胶的步骤应在生物安全柜内完成。

定期检测水浴锅、离心机等设备是否存在核酸酶/蛋白酶污染。

五、质量控制设置（用于检测是否发生交叉污染）

通过设置对照孔评估系统是否存在污染：

注意：若空白孔出现显色，提示存在系统性污染；阴性对照异常则可能是一抗或二抗受到干扰。

总之，若怀疑试剂交叉污染，应立即停止当前实验流程，更换新批次试剂重新运行质控样本进行比对；同时检查移液器、洗板机等设备是否清洁到位。选择批间差小、配套完整质控品的试剂盒可进一步提升检测可靠性。