原代细胞直接从生物体分离，保留了体内遗传特性，但因其培养条件要求高、传代次数有限，一旦发生污染，不仅影响实验结果可靠性，还可能导致珍贵样本丢失。了解各类污染的来源与特点，是预防和及时处理的关键。
常见污染类型、特征与来源
以下为原代细胞培养中主要的污染类型及其具体信息：
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污染类型 |
主要特征 |
典型来源 |
是否易察觉 |
关键应对措施 |
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细菌污染 |
培养液迅速变黄、浑浊，有异味；显微镜下可见黑色细沙状或圆球状颗粒漂浮。细胞生长停滞，24-72小时内大量死亡。 |
操作不当（手部、衣物）、器材灭菌不彻底、培养基/血清污染。 |
是，极易发现 |
添加抗生素冲击治疗，严重时丢弃。 |
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真菌/霉菌污染 |
培养液初期清亮，后出现白色、黄色或黑色絮状、丝状漂浮物（如绒毛、蛛网状）。细胞活力逐渐下降，繁殖减慢 。 |
实验人员（实验服、头发）、空气尘埃、超净台或培养箱清洁不到位。 |
较易（肉眼可见漂浮物） |
极难根除，建议立即丢弃并彻底消毒环境。 |
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支原体污染 |
培养液变化不明显，不浑浊；细胞生长缓慢、形态改变（变圆、空泡化），核异常 。隐蔽性强，常被忽视。 |
最主要来源是牛血清，其次为气溶胶交叉污染。 |
否，极难察觉 |
需专用检测（PCR、荧光染色）；可尝试用清除剂处理，否则丢弃。 |
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“黑胶虫”污染 |
低倍镜下为静止或运动的黑色小点，高倍镜下可能见其游动；培养液不浑浊，对细胞影响较小。 |
来源不明，学术界有争议；可能与劣质血清有关。 |
否，常被误认为细胞碎片 |
可增加细胞密度观察，一般不影响后续实验。 |
污染的系统性来源分析
除了微生物本身，污染还源于整个培养体系的漏洞：
操作技术问题：未严格遵守无菌规程，如频繁出入培养室、说话/咳嗽、使用未灭菌的移液管等
试剂与耗材问题：血清是支原体的主要载体；培养基、PBS配制或储存不当也可能引入细菌。
环境与设备问题：超净台过滤膜失效、培养箱水盘滋生霉菌、CO₂孵箱未定期清洁消毒。人多且着装不规范也会增加风险。
原代组织自身污染：组织在离体前已受污染，或冲洗不充分。
例如，有用户反映小鼠原代肝细胞培养时总是特定孔污染，这可能与铺板时枪头接触了已污染的瓶口或培养箱局部污染有关。
总结
原代细胞培养的污染防控核心在于“预防为主”。 最常见的污染是细菌和真菌，它们易于识别但破坏力强；而支原体因高度隐蔽，危害最大，其主要来源是血清。因此，必须严格执行无菌操作，使用高质量的试剂（尤其是经过支原体检测的血清），并定期对超净台、培养箱等关键设备进行彻底清洁和消毒。
