处于免疫检测里，担当关键工具角色的二抗，其选择跟实验结果的准确性以及可靠性直接相关联。好多科研人员于实验设计之际，常常把更多精力投放于一抗上面，然而却忽视了二抗这只“看不见的手”同样对实验的成败起着决定性作用。
怎么选二抗种属
二抗种属的选择，得跟一抗宿主物种相适配，要是一抗源自小鼠那二抗就得选抗小鼠的抗体，与此同时还得考量样本来源，要是实验样本本身含免疫球蛋白，那就得避开选跟样本同种属的二抗，防止出现交叉反应，对多重染色实验而言，不同一抗的种属非得相互区分开，才能够保证二抗特异性识别各自靶标。
如何避免非特异性结合
背景增高的主要诱因是二抗的非特异性结合，优质的二抗产品会借助预吸附处理删去与常见物种免疫球蛋白交叉反应的抗体，实验操作期间，封闭剂的挑选同样关键，运用与二抗同种属的正常血清实施封闭能够有效降低背景信号，对于组织切片类实验而言，建议添加适当浓度的表面活性剂来减少抗体与组织间的非特异性吸附。
效价验证看哪里
二抗的效价，不能单纯依据说明书上所给出的那些推荐稀释比例来看待。不同的实验体系，对于二抗浓度的要求，存在着十分明显的差异，故而建议在正式开展实验之前，进行梯度稀释预实验。质量优良的二抗产品，在推荐稀释度的范围里头，应该能够维持信号强度的线性关系，并且背景控制状况良好。储存条件，会直接对效价稳定性产生影响，采用分装保存的方式，能够避免因反复冻融而致使的效价下降。
