在免疫组化技术里头，抗体的选用跟运用直接就决定了实验结果的可信程度，不管是头一回接触的研究者，还是经验丰富的研究者，都会碰到抗体特异性、背景控制以及信号强度等的实际难题，把握好了抗体使用的核心要点，能够让你的实验取得事半功倍的效果。
抗体怎么选才合适
首先，要明确目标蛋白所属的种属以及其结构域。接着，查阅文献以及数据库，以此来确认抗体是不是能够识别你所拥有的样本里的特定表位。多克隆抗体灵敏度是高的，然而有可能存在交叉反应，单克隆抗体特异性很强，不过有可能会漏检某些异构体。依据样本类型以及检测需求，优先去选择经过验证的抗体，并且查看引用文献当中的实验条件。
如何优化实验条件
抗体之结合效率乃是直接被抗原修复方式所影响的呈现。针对于石蜡包埋的样本而言，其常用的方式为高温高压修复或者酶修复，并且需要依据抗体说明书寻找摸索最佳之pH值以及修复的时间。抗体稀释的比例并非完全固定不变的，建议是从推举的浓度起始，展开梯度稀释测试，从而能够寻觅到信噪比最高的工作浓度。孵育的时间以及温度同样需要细致谨慎地加以控制，4度过夜的情况之下通常能够获取到更为均匀的染色效果呈现。
背景过高怎么解决
非特异性结合又或者是内源性酶活性常常致使背景染色出现，封闭液的挑选相当关键，通常会选用山羊血清或者BSA，封闭的时长起码得30分钟，一抗以及二抗的洗涤步骤务必充分，每次靠着PBS浸泡5分钟，重复3次往上，要是背景依旧存在，能够试着于抗体稀释液当中添加吐温 - 20，又或者是更换封闭剂的种类。
抗体保存有哪些技巧
当收到抗体之后，要依据说明书将其分装成小份，以此来避免反复进行冻融操作。要是短期使用的话，能够存放于4度的环境中，若长期保存则需放置在-20度的地方，同时要注意标记好日期以及浓度。对于稀释后的抗体，尽量在当天就用完，所剩余的部分不适宜再次进行冷冻处理。每一次实验都要记录抗体的批次号以及表现情况，从而便于追溯问题产生的来源。
