一抗用作免疫学实验里的核心工具，其质量直接对最终数据的可靠性起到决定作用，从Western blot直至免疫荧光，一抗跟目标抗原的特异性结合是后续信号放大的基础，好多实验失败，根源常常处在一抗的选择以及使用方面。
一抗怎么选
依据实验类型以及应用场景来挑选一抗，不同的实验对于抗体的要求差异是十分大的，Western blot需要抗体去识别变性蛋白的线性表位，免疫组化却需要识别天然构象表位，单克隆抗体特异性高然而表位单一，多克隆抗体灵敏度高但有可能存在交叉反应，优先去查阅文献中同领域研究者所使用的产品，克隆号和货号是最为直接的参考依据。
一抗特异性如何验证
只是看说明书，是不能进行特异性验证的。阴性对照和阳性对照必须要设置，要使用敲除细胞裂解液或者阻断肽，以此来验证信号是不是真正源自目标蛋白。当有多个抗体检测同一个靶点时，条带大小应当和理论分子量相吻合，一旦出现额外条带，就要对非特异性结合保持警惕。对于免疫组化来讲，通过同型对照抗体能够排除Fc受体介导的非特异染色。
一抗保存注意事项
延长抗体寿命这点上，分装冻存是关键所在。多数一抗里面含有50%甘油，能够在-20℃进行长期保存，然而反复冻融这种行为会把抗体活性给破坏掉，首次使用过后应该按照单次用量来进行分装。要避免去使用无霜冰箱，因为其自动除霜所引发的温度波动会加快抗体降解。稀释后的一抗应当在4℃进行短期存放，并且加入叠氮钠以此来防止微生物污染。
一抗使用常见问题
信号微弱或者不存在非特异性背景过高，这是两个主要的问题所在。当信号微弱的时候，可以试着提升抗体的浓度，或者延长其孵育的时间，然而背景也会同其一起增加。封闭的情况不充分常常会致使背景过高，应该依据实验体系来挑选BSA或者脱脂牛奶。洗涤缓冲液里面吐温的浓度同样需要进行优化，若是过高就会削弱信号，一旦过低便没办法洗净非特异结合。每一次进行实验都要记录下抗体稀释的比例以及孵育的条件，以便于后续能够进行复现。
于实际操作期间，你可曾碰到过这样的状况，即一抗在反复加以使用之时，其效果却呈现出越来越差的态势的？
