首先，流式抗体在流式细胞术实验里属于核心试剂，其次，其质量会直接对数据结果的可靠性予以决定。然后，好多新手在首次接触之际，当面对诸多克隆号、荧光染料以及同型对照时，常常不知道该从哪里着手。最后，本文依据多年实战经验，梳理出选择跟使用流式抗体的关键要点。
流式抗体如何挑选合适的克隆号
决定抗体识别抗原表位特异性的是克隆号，同一靶点存在几十种克隆号，然而并非所有克隆号都适用于流式检测，建议优先去查阅文献或者厂家官网验证数据，从而选择经过流式应用验证的克隆，比如人CD3抗体常用OKT3或者UCHT1克隆，它们染色清晰且背景低，同时要注意，不同克隆号的荧光强度差异显著，这直接影响阳性细胞群的分离效果。
流式抗体的荧光标记怎么搭配
选取荧光标记会对多色实验的分辨率产生直接影响，首先得去了解仪器配置，要确认激光器以及滤光片所支持的荧光通道，接着需要依照“强表达弱荧光，弱表达强荧光”的原则，对于低丰度靶点要搭配像PE、APC等高亮度的染料，而高丰度靶点则能够使用如FITC等中等亮度的染料，而且要同时留意光谱重叠的情况，尽可能去选择溢漏小的组合，并且要设置单染管来做补偿调节。
流式抗体使用常见问题如何解决
做实验时，常常会碰到背景过高的状况，或者阳性率偏低的情形，又或者细胞分群不太好的情况。背景高，有可能跟抗体浓度过高有关系，也可能是洗涤不够充分导致的，还可能是死细胞造成了干扰，建议去进行抗体滴定以便找出最佳浓度，并且添加死活染料来排除死细胞。阳性率偏低的话，就得检查抗体是不是失效了，抗原位点有没有被封闭，或者细胞固定透化步骤是不是破坏了表位。每一次实验都一定要设置同型对照以及FMO对照，这可是判断非特异性染色的关键所在。
流式抗体的保存与稀释注意事项
为了确保流式技术的准确性和可靠性，对于多为蛋白溶液形态的流式抗体，需要尽可能避免反复冻融以及高温环境，因为这二者会导致其变性失效。当收到流式抗体后，应当依据说明书将其分装成单次使用的量，并且存放于4℃的避光环境之中，千万不要进行冷冻操作。在对流式抗体进行稀释的时候，务必使用专用的流式染色缓冲液，要避免使用含有叠氮钠的保存液，原因在于其会对细胞活性产生抑制作用。流式抗体开盖之后，最好在6个月内将其用完，还需要定期运用质控微球来检测抗体效价，从而保证批次之间的稳定性。
在流式抗体实验里头，你所碰到的最让你头疼不已的那个问题究竟是什么呢，不妨欢迎你留言去分享一下你的相关经验哟。
