有这样一种复合物,它叫酶标记抗体,是把酶分子跟抗体蛋白借助化学交联结合起来形成的,在各类生物检测实验里被广泛运用,它凭借抗体特有的识别靶标的能力,还有酶催化底物生成信号的放大效应,能够灵敏地对微量目标进行物质检测。
什么是酶标记抗体
在于抗体与酶的“强强联合”,这是酶标记抗体的核心所在。抗体的作用是负责精准捕获目标抗原,像辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶等,却负责把无色底物转化成有色产物。原本肉眼没办法直接观察到的抗原 - 抗体反应,因这种设计变成清晰可见的颜色变化了,检测灵敏度因此得到极大提升。
如何制备酶标记抗体
制作过程常常运用戊二醛法或者过碘酸钠法,就拿辣根过氧化物酶来说,首先用过碘酸钠去氧化酶分子上的糖基,进而产生醛基,接着与抗体上的氨基发生共价结合,反应之后要经过透析或者凝胶过滤进行纯化,借此去除没有结合的酶以及抗体,这样才能够得到具备高活性的酶标记抗体成品。
酶标记抗体有哪些应用
在实验室里,酶标记抗体属于酶联免疫吸附测定也就是 ELISA 和免疫印迹也就是 Western Blot 的关键试剂,好比在食品安全检测之时,运用它去测定样品里面是不是残留特定蛋白类污染物,在基础研究当中,它是用于定位细胞内的目标蛋白的,它的信号有着放大特性从而致使检测下限能够达到纳克甚至皮克级别。
怎样选择酶标记抗体
进行选择之际,需要着重留意三点,其一,抗体跟酶的标记比例是不是恰当,要是摩尔比过高,那么就会对抗体活性产生影响,要是过低,信号就会微弱,其二,抗体的种属来源跟检测体系相匹配与否,其三,酶的种类跟后续底物是否兼容。商品化的产品一般会给出效价以及交叉反应的数据,建议优先去挑选经过验证的稳定型标记物。