作为细胞分析里重要工具的流式抗体，在基础研究与应用领域所发挥着的是关键作用。掌握住其基本原理以及操作要点，能够对实验人员起到帮助从而获得可靠的数据结果。
流式抗体怎么选
要选择适合的流式抗体，首先得明确目标抗原的种属，接着要明确其表达丰度。不同来源的抗体，对样品的识别效率有差异，建议优先去查阅相关文献里已验证的克隆号。荧光染料的选择，直接影响检测灵敏度，在多色方案里，要注意避免光谱重叠造成干扰。对于低表达抗原，可采用亮染料标记的抗体，以此增强信号分辨能力。
流式抗体染色步骤
在进行染色以前，得先制备出高质量的单细胞悬液，并且细胞活率得保持在较高的那个水准，以此来避免出现非特异性结合的情况。首先，要加入能够固定活力的染料，去区分那些死细胞，然后再开展表面抗体孵育的操作。染色的体积以及抗体的用量，需要借助预实验来进行优化，通常每百万细胞要加入推荐滴定量的抗体。孵育的条件是在避光的状态下，于冰上或者室温来进行，时间要控制在15到30分钟的范围。洗涤这个步骤是绝对不可以省略的，建议使用含有蛋白的缓冲液，以便减少背景。
流式抗体实验常见问题
抗体或洗涤方面的问题，致使背景过高，可试着减少抗体用量，增加洗涤次数。无阳性信号时，要查看抗体是否失效或靶标表达有无缺失，建议同时设置同型对照与阳性对照。多色实验里，补偿调节困难或许是荧光溢漏严重所致，选用光谱重叠小的染料组合，或采用全光谱流式，能够改善。细胞粘连会引发假阳性事件，加入DNA染料排除粘连体，是有效的办法。
流式抗体保存与使用
没有被标记的抗体一般能够在二至八摄氏度进行短期保存，要是长期保存的话就得进行分装然后冷冻保存在零下二十摄氏度，以此来避免反复冻融。发出荧光的抗体一定要避免光照来保存，用铝箔包裹或者放在棕色管里能够延缓荧光的淬灭。打开盖子之后建议标记好日期，工作液要现配从而现用。抗体进行稀释需要使用专门的缓冲液，含有叠氮钠的保存液会抑制细胞的活性，在染色之前一定要充分洗涤以此去除。
在流式抗体实验里头，您碰到过什么样棘手的染色方面的问题呢，欢迎于评论区域分享您所拥有的经验哟。
