生物科研里，能直接反映动物体内真实生理状态的山羊原代细胞，是重要的体外模型，掌握它的分离及培养方法，对提升实验数据可靠性特别关键，下面从实际操作角度分享关键技术点。
山羊原代细胞分离步骤
组织获取之后，要在2小时之内进行处理，选取1月龄以内山羊的皮肤或者肌肉样本，首先把脂肪以及结缔组织去除掉，使用含有双抗的PBS反复漂洗3次啊。接着剪成1立方毫米的小块，随后加入0.1%Ⅰ型胶原酶，在37℃的环境下消化40分钟，每隔10分钟摇晃一回。终止消化以后过100目筛网，再离心收集细胞。
原代细胞培养注意事项
将经过消化之后的细胞，要用完全培养基来进行重悬，这种培养基所推荐的是DMEM，不过要添加10%的胎牛血清以及1%的非必需氨基酸。接种的密度需要控制在5×10^5个/毫升，然后放置于37℃、5%二氧化碳的培养箱当中。在前24个小时之内，不要去移动培养瓶，到了第3天的时候，要进行首次半量换液。当观察到细胞呈现出梭形或者是多角形的时候，那就表明其生长状况良好。
细胞污染怎么避免
摆放着各类仪器的操作台，在使用之前，需通过紫外光照射整整30分钟，而所有用于操作的器械，要放到高温环境中进行灭菌处理。专门用于细胞培养的培养液，要添加固定比例的物质，即加入浓度为100 U/mL的青霉素以及浓度为0.1 mg/mL的链霉素。每一次进行换液操作之前，需使用酒精棉仔细擦拭瓶口部位，针对不同的细胞株，还得使用各自独立的移液管。要是发现培养基出现变浑浊的现象，或者细胞出现漂浮的状态，应该马上把含有其中的液体快速弃去，同时还要对培养瓶进行消毒，千万不要打开瓶盖后在显微镜下面进行观察确认。
传代时机如何把握
传代是在细胞融合度达到80%的时候进行，通常原代山羊细胞要7至10天。用0.25%胰蛋白酶 - EDTA在37℃消化2分钟，在显微镜下看到细胞变圆且部分脱落时马上终止。按1:2比例分瓶，传代后的前两次换液要格外轻柔，第3代之后细胞活性最稳定。
