原理是什么
标记抗原会同样本里的待测抗原，一起竞争有限的抗体结合位点，这是竞争法ELISA试剂盒的关键所在。样本里待测抗原浓度越高，标记抗原和抗体结合的量就越少，最终显色信号跟待测抗原浓度是成反比的。这种独特设计很适合检测小分子物质，像激素、毒素、药物残留这类无法同时结合两个抗体的靶标。明白这一原理是实验成功的首要步骤，也是排除干扰数据的根基。
如何提升检测灵敏度
如需提升竞争法 ELISA 试剂盒的检测灵敏度，得从抗体配对以及孵育时间着手。挑选高亲和力的抗体是重点，亲和力越高，竞争反应越剧烈，低浓度样本的区分度就越显著。适度延长竞争反应环节的孵育时间，一般从 30 分钟延长到 60 分钟，能够让抗原抗体结合更完备。同时降低标记抗原的使用浓度，也可使竞争反应对样本里低丰度待测物更灵敏。切莫忘记优化洗涤步骤，残留的非特异性结合会严重降低灵敏度。
常见干扰怎么排除
竞争法 ELISA 试剂盒里，最常见的干扰来源是样品基质效应。血浆之中，各类蛋白质影响抗原抗体的正常结合，或者是组织提取液含有脂质，又或者细胞培养上清的pH波动，都有可能造成这种影响。建立标准曲线时，要使用跟样品同样基质的稀释液，以此来解决问题，或者适当稀释样品，从而降低基质浓度。还有一个常见问题是边缘效应，酶标板其边缘孔由于温度不均匀，致使显色出现偏差，建议把反应板放进湿盒里，并且放置在37℃的恒温培养箱中进行孵育。每次实验都设置复孔以及阳性质控，这样能够快速定位异常数据。
数据换算注意事项
用于竞争法 ELISA 试剂盒的数据处理采取的是四参数逻辑斯蒂曲线拟合方式，并非能够简单地运用线性回归，横坐标是标准品浓度的对数，纵坐标是吸光度值或者结合率，在进行计算时，首先要去求出各标准孔的 B/B0 值，也就是每个浓度孔的 OD 值除以零标准孔的 OD 值，接着是以 B/B0 作为纵坐标、浓度对数作为横坐标来拟合曲线，要留意的是当样本 OD 值高于零标准孔或者低于高浓度标准孔时，此数据已然超出检测范围，需要经过稀释或者浓缩后再次测定。保存每次实验的标准曲线参数，便于不同批次间的结果比对。
