从大鼠组织里直接分离出来的正常细胞是大鼠原代细胞，它最大程度地保留了体内细胞的生理特性以及功能状态，是基础生物学跟药物筛选研究里不可缺少的模型工具。它能比传代细胞系更真实地反映体内环境之下的细胞行为，所以被广泛运用在毒理学、代谢调控以及再生机制等探索领域。然而，分离与培养过程对操作要求非常高，稍微不注意就会对细胞活性跟实验结果造成影响。
大鼠原代细胞怎么分离
分离成败直接取决于组织来源的选择，常见的组织来源有肝、肾、心肌以及神经组织，不同的组织要匹配对应 的酶消化法或者机械分散法，比如肝脏组织常常采用胶原酶灌流来进行消化，而心肌组织则需要联合胰蛋白酶逐步进行解离，操作的整个过程都必须要保持无菌，且要严格地控制消化时间，若是过度消化就会损伤细胞膜，致使贴壁率急剧下降，分离之后应该马上用含有血清的培养基将酶的活性终止，并且要通过滤网把未消化的组织块去除。
大鼠原代细胞培养条件
维持细胞健康的核心为培养基成分以及培养环境，基础培养基大多选用DMEM或者RPMI - 1640，并且添加10%至20%的胎牛血清，以此来提供生长所必需的营养因子，培养箱条件要恒定在37℃、5%二氧化碳以及饱和湿度，pH值稳定在7.2至7.4之间，另外，原代细胞对于机械震动以及温度波动极为敏感，换液的时候必须预温培养基，动作要轻柔，防止吹打产生气泡，部分细胞类型还需要额外补充谷氨酰胺或者非必需氨基酸。
大鼠原代细胞鉴定方法
分离培养过后，必须开展纯度跟活性鉴定，如此方可确认细胞身份。最为常用的办法是形态学观察，举例来说，肝细胞呈现典型多边形且形成双核，神经元则伸出突起构成网络。台盼蓝染色能够快速评估细胞存活率，其要求活细胞占比超出90%。免疫细胞化学染色可以标记特异性抗原，如使用角蛋白抗体鉴定上皮来源细胞，或者用波形蛋白抗体标记成纤维细胞。流式细胞术则给出更精准的表型数据，适用于大规模定量分析。
