供实验用的小鼠原代细胞，是直接从作为实验对象的小鼠机体组织里分离而得到的离体细胞，其离体细胞最大程度地保留了来源组织的作为机体组织的生理特性以及作为机体组织的基因表达谱。与细胞系进行比较而言，它更能够反映在机体内部真正的状态，是在基础科研中进行药物筛选、机制探究等不可或缺的实验材料。掌握其分离与培养技术，对于获得可靠数据来说至关重要。
小鼠原代细胞怎么分离
最开始的步骤，是要在无菌状况下，去获取像肝脏、肾脏或者胚胎这类目标组织，这是分离小鼠原代细胞需迈出的第一步。接着，要把组织放置到预冷的磷酸盐缓冲液里头，再用眼科剪反复地剪碎，一直剪到类似1立方毫米大小的糊状。之后，添加胶原酶或者胰蛋白酶，于37摄氏度的水浴当中消化15至30分钟，在这个期间要轻轻地摇晃。消化完了之后，加入含血清培养基以此终止反应，经过100微米细胞筛过滤，从而去除未消化的组织块。滤液进行离心后，把上清液弃掉，运用红细胞裂解液处理5分钟，这样就能获得细胞沉淀。整个流程都得在生物安全柜内开展操作，以此确保无菌环境。
小鼠原代细胞培养要点
待取得细胞沉淀后，要用完全培养基去重悬，接着接种进培养瓶里。培养基一般选用DMEM或者RPMI1640，还要添加10%胎牛血清以及1%双抗，具体的配方会依据细胞类型来定。小鼠原代细胞对于培养条件较为敏感，应当放置在37摄氏度、5%二氧化碳的恒温培养箱之中。首次换液是在接种后置24小时开展，目的是去除那些未贴壁的死细胞。之后每隔2到3天就要更换一回培养基，观察细胞汇合度达到70%至80%的时候便可以传代了。要留意，原代细胞传代的次数存在限制，通常不会超过5代，不然的话，就会出现衰老或者分化的情况。
小鼠原代细胞鉴定方法
分离培养后，细胞纯度与身份必须要进行鉴定。最常用的乃是形态学观察，其中成纤维细胞呈现为长梭形，肝细胞呈现为多边形并且能够见到双核。免疫荧光染色能够对特异性标志物予以检测，比如使用波形蛋白去标记成纤维细胞，使用白蛋白去标记肝细胞。流式细胞术能够对阳性细胞比例展开定量分析，其要求通常是不低于90%。此外，能够借助短串联重复序列分析来排除交叉污染，或者使用支原体检测试剂盒来确认无污染。只有经过严格鉴定的细胞，后续实验结果才会具备可重复性。
