用于分子生物学实验的 PCR 试剂盒，是绝对不能缺少的工具，它的性能会直接对检测结果的准确性以及可重复性产生影响。在市场上有着种类极为繁多的产品时，怎样依据自身需求去挑选适宜的试剂盒，这是众多实验人员所关心的问题。在此下面从几个实际操作的角度来谈谈我的经验。
PCR试剂盒怎么选
一开始要清楚实验的具体类型。常规定性检测跟荧光定量PCR针对试剂盒的要求不一样，前者注重扩增效率以及特异性等，后者除了这些还得考量荧光染料兼容性以及Ct值稳定性这些方面。其次要看酶体系，热启动Taq酶能够有效地降低非特异性扩增的情况发生，它适合那些复杂的模板。另外，试剂盒的组分是不是预混好的，是不是需要额外去添加镁离子或者dNTP，这同样会对操作的便捷程度产生影响。建议优先挑选那种有着详细的质控报告并且用户口碑稳定的产品。
PCR试剂盒如何保存
试剂盒性能下降有常见缘由是保存方面出现不当情况，多数试剂盒里的酶、引物探针以及dNTP对温度敏感，在未开封的时候应该严格按照说明书要求存放于零下二十摄氏度，反复冻融这种行为会造成酶活性降低，所以建议首次解冻之后将其分装成小管，以此来避免整盒多次进行冻融，部分预混液能够在四摄氏度短期放置几天，不过长期的话依旧需要冷冻，另外，要对荧光染料注意进行避光保存，防止因光漂白致使信号减弱。
PCR试剂盒污染怎么避免
PCR实验的头号难题是气溶胶污染 ，使用试剂盒时应该设立分区 ， 区和模板提取的、扩增分析的那些区域要进行物理隔离 ，每次加样之后要及时将吸头更换 ，并且要选用带有滤芯的吸头 ，试剂盒里的用阴性对照要是出现扩增 ，那就表明体系已经受到污染 ，这个时候应该及时去更换新的试剂盒批次 ，并且需要利用核酸清除剂把台面彻底清洁完成 ，另外 ，不可以将已经开过盖子的试剂很长时间暴露在空气当中 ，用完之后立刻把管盖旋紧。
PCR试剂盒扩增效率低怎么办
一旦碰到扩增曲线起峰晚这种情况，或者荧光值偏偏偏低，首先得去检查模板质量，因为降解了的模板或者含有抑制物的那种模板，是会把效率给拉低的。其次呢，要去确认退火温度是不是合适，能够尝试进行梯度PCR，以此找出最佳温度。要是试剂盒本身已经经过反复冻融，或者已经过期了，酶活性下降同样会致使效率变低，建议启用新的批次。另外，反应体系的配制必须精准无误，移液器要定期校准，防止出现体积误差。要是问题依旧存在，那就联系厂家的技术支援，从而获取优化方案。
你于使用PCR试剂盒之际，有无碰到非特异性条带或者引物二聚体难以消除的情形呢？
