在快速 PCR 扩增试剂盒里，是通过去优化酶体系以及缓冲液成分的方式，把传统 PCR 所需的 2 - 3 小时给缩短至 30 - 60 分钟的，它借助新型 DNA 聚合酶还有特殊添加剂，极大程度地减少了变性、退火以及延伸步骤的停留时间，与此同时还保持着扩增特异性和产量，对于那些需要高频检测或者时间紧迫的实验室而言，这一套工具能够显著地提升工作流程效率。
快速PCR扩增试剂盒原理是什么
快速PCR的关键之处在于运用经过改造的DNA聚合酶，举例来说，借助定点突变提升其持续合成能力以及热稳定性。这类酶在大约72℃的时候，能够每秒接入超过100个核苷酸，这远远高于普通的Taq酶。与此同时，试剂盒当中会添加单链结合蛋白或者特定的离子配比，以此加速引物与模板的退火过程，进而把每个循环压缩到10 - 20秒。
快速PCR扩增试剂盒使用步骤详解
使用之前，要先把各组分于室温状态下进行解冻，接着予以离心处理并使其混匀，以此来避免出现气泡。在配制反应体系这个过程当中，要依照说明书给出的比例，加入预混液、引物、模板以及去离子水。推荐的总体系是20或者50微升。之后要设置PCR程序：预变性要在95℃持续30秒；循环步骤里变性是95℃ 1至3秒，退火延伸是60至72℃ 1至15秒，总共30至35个循环；最后在72℃再延伸10秒。需要注意退火温度得依据引物Tm值去进行调整。
快速PCR扩增试剂盒需要注意哪些细节
一个直接关乎快速PCR成败的因素是模板质量，建议采用纯度较高的DNA，以此来避免会出现蛋白或有机溶剂残留的情况，在进行引物设计时，长度要维持在18至25个碱基的范围，GC含量需处于40%至60%之间，扩增片段的长度不适合超出1kb，不然快速程序有可能致使长片段扩增效率降低，另外，反应体系一定要在冰上开展操作，避免酶在室温环境下失去活性，与此同时还要设置阳性对照以及阴性对照来证实结果是不是可靠的。
