流式细胞术实验里的核心工具是流式抗体，它借助特异性去识别细胞表面或者内部的抗原，助于开展研究的人员精准剖析细胞表型以及功能。正确理解流式抗体并且加以使用，直接对实验数据的可靠性以及重复性产生影响。
流式抗体如何选择
打算挑选流式抗体期间，最先得去确认目标抗原所属的种属以及其表达的位置，像是究竟是人源的还是鼠源的，是膜蛋白呢还是胞内蛋白。接着要留意抗体的克隆号，单克隆抗体具备特异性强的特性，建议优先进行选用。提议去查阅相关的文献或者数据库，从而挑选经过验证的抗体，防止盲目地跟风。
荧光染料怎么搭配
要考虑流式细胞仪的激光器以及滤光片配置来选择荧光染料，常用染料有FITC、PE、APC等，搭配原则是防止光谱过度重叠，像绿色荧光与橙色荧光共同使用时，要查看补偿是否能够控制，多色实验建议采取亮度高且稳定性好的染料，以此减少串色干扰。
流式抗体保存要点
流式抗体一般存放于二至八摄氏度上下，要防止反复地冻融以及强光的照射。荧光标记的那种抗体特别惧怕光，每一次取用之后都应当马上放回到避开光线的环境之中。需留意检查抗体是否出现了沉淀或者变色的情况，要是发现有异常那就应该停止使用。分装保存能够降低被污染的风险，然而不要分装得过细致使影响活性。
如何优化染色步骤
进行染色之前，需要开展细胞计数以及活力检测，当活细胞比例低于百分之八十五的时候，结果是不可靠的。封闭非特异性结合位点，常常会使用BSA或者血清，在室温的环境下孵育十到十五分钟就可以了。抗体孵育的时间以及温度，要严格按照说明书去执行，一般是在四摄氏度避光的条件下染色三十分钟。洗涤的时候，使用含有百分之零点五BSA的缓冲液，离心速度不适合过高。
