在流式细胞术中，流式抗体属于关键工具，它被用来识别以及标记细胞表面特定分子。正确地去选择并且使用流式抗体，会直接对实验数据的准确性以及可重复性产生影响。本文是从实际应用着手，分享关于流式抗体的选择、保存还有操作要点，以此帮助科研人员避开常见问题。
流式抗体怎么选
选出适合的流式抗体第一步得先确定目标抗原所属种属以及其表达丰度，不同种属的抗体跟抗原相结合的能力是不一样的，建议去查阅那些文献或者数据库以此来挑选经过验证的克隆号，以及同时也要去留意抗体的荧光染料搭配情况，防止光谱出现重叠从而产生干扰，在多色彩实验里，选择优先选用那些亮度高、渗漏低的染料，并且设置单染对照用于调节补偿。
流式抗体如何保存
将流式抗体以液体形式所提供的，长期保存之时要在二至八摄氏度的避光环境当中，千万不能进行冷冻。反复冻融这种行为会把抗体结构给破坏掉，致使效价下降。要是需要进行分装的话，应当用到无菌低吸附管，以此来避免污染以及浓度出现变化的情况。每次使用完毕之后要及时放回到冷藏之处，从而减少在室温之下暴露的时间。要注意去检查抗体是否有出现沉淀或者变色的现象。要是有异常的话，就应该停止使用。
流式抗体使用技巧
染色之前，一定要去做滴定实验，以此来确定最佳的工作浓度。要是浓度过高的话，就会增加非特异性背景，要是过低的话，就会出现漏检阳性信号的情况。对于细胞样本而言，需要先进行Fc受体封闭，目的是减少非特异性结合。染色的时间要依据抗体亲和力去调整，通常在室温下避光孵育15到30分钟。洗涤这个步骤是绝对不能省略的，使用含有BSA的缓冲液能够降低背景噪声。
流式抗体常见误区
不少人觉得抗体用量数目之多信号就会越强，可实际上用量过度会致使出现假阳性情况。而有一个误区是对同型对照予以忽略，同型对照能够将非特异性染色排除掉，有助于准确地进行设门操作。除此之外，固定破膜处理有可能对某些抗体的结合表位产生影响，在使用之前应当对兼容性进行测试。要定期使用质控微球来验证仪器性能怎样，以此保证数据是可靠的。
