酶标记抗体的原理是什么
酶标记抗体，是经化学交联，把酶分子跟特异性抗体相结合，而形成的复合物。此复合物，既留存了抗体的抗原识别能力，又拥有酶催化底物显色或者发光的特性。于检测体系里，当酶标记抗体跟目标抗原相结合后，加入相应底物，便可借由酶促反应，产生能够测量的信号，进而达成目标物的定性或者定量分析。常用的酶涵盖辣根过氧化物酶以及碱性磷酸酶，它们具备高催化效率以及良好稳定性。
如何制备高质量的酶标记抗体
惯用戊二醛交联法或者过碘酸钠法来制备酶标记抗体，戊二醛身为双功能的试剂，能够把抗体还有酶的氨基同时进行连接，操作简便然而也许会形成多聚体，过碘酸钠法先是把辣根过氧化物酶的糖基氧化从而生成醛基，接着再跟抗体氨基相结合，标记效率更高而且活性损失少，制备期间要严格控制反应的pH、温度以及摩尔比，并且借助凝胶过滤或者透析把未结合的酶还有抗体去掉，标记后的产品要进行分装冻存，防止反复冻融致使活性下降。
酶标记抗体在检测中的关键技巧
用酶标记抗体之际，稀释倍数乃是关乎检测灵敏度的关键参数。一般经由棋盘滴定法去确定最佳工作浓度，这既要确保信号强度，又得规避非特异性吸附。封闭液的选取同样极为重要，常用的脱脂奶粉或者牛血清白蛋白能够有效降低背景干扰。孵育时间以及温度得保持恒定，在室温下振荡孵育1到2小时便可获取稳定结果。洗涤步骤绝对不能省略，每次洗涤都要用含吐温-20的缓冲液，把未结合的标记物彻底清除掉。
储存酶标记抗体要注意什么
针对温度以及蛋白酶，酶标记抗体展现出敏感特性，要是打算进行长期保存，建议添加等同体积的甘油随后放置于零下二十摄氏度的环境中，对于短期使用情况（一至两周），能够在四摄氏度的环境里进行避光储存，不过需要添加诸如叠氮钠此类的防腐剂以此抑制微生物生长，要注意叠氮钠会对辣根过氧化物酶的活性产生抑制作用，要是用于显色检测应当改用硫柳汞，采用分装的方式进行储存能够降低污染风险，每一支单次用量应当防止反复开启，需要定期检测标记物的效价，当信号衰减超过百分之三十的时候应当重新进行制备。
