用于细胞分析的流式抗体，是其中的核心工具，它借助特异性结合靶标，还带着荧光标记，能助力研究者快速去识别不一样的细胞群。要明白它的基本特性，那可是高效实验的第一步。接下来从原理开始，再到挑选，最后到使用细节，会逐步把关键要点给拆解开来。
流式抗体原理是什么
流式抗体籍由抗原与抗体的特异性识别来发挥工作原理，每个抗体分子都附着了特定情形的荧光染料，一旦抗体同细胞表面或者胞内靶点相结合，于激光激发之际便能发出相应波长的荧光信号，流式细胞仪依托荧光强度以及散射光，去判别不同的细胞类型以及状态，而这一运行过程需要抗体纯度足够高、交叉反应低，不然容易出现假阳性或者碰到背景干扰，搞懂其原理有益于后续挑选适宜的产品。
在实际应用当中，荧光染料的亮度会对结果造成影响，抗体克隆号同样也会对结果产生影响；举例来说，如果靶标表达较弱，那么适合选用像PE或者APC这类强荧光染料，如果靶标表达较高，那么可以尝试选用FITC；与此同时，抗体能不能识别固定之后或者破膜之后的表位，这也由克隆设计来决定；建议在进行实验之前去查阅产品说明书，以此来确认抗体适用的样本类型（比如全血、培养细胞）以及处理方式，防止因为条件不匹配而致使数据出现偏差。
如何选择流式抗体
明确检测靶点的人称或小鼠种属来源，以及样本的种属一致性后，再去挑选流式抗体。不同供应商所提供的克隆号，其性能差异显著，优先选用已验证发表的文献里或者权威数据库当中的克隆。另外，在多色实验里要考虑荧光溢出，挑选光谱重叠较小的组合，就像搭配PE和PerCP-Cy5.5的时候，要评估补偿矩阵是否能够把控。这些细小的环节，直接对数据分辨率和分群效果产生影响。
在实际作采购这一行为之时，要去留意关注抗体所具有的形式，其形式包含纯化、直接标记以及预混组合这几种情况。预混组合尽管便利性是有的，然而灵活性却比较低；直接标记抗体将二抗孵育步骤给节省了下来，相对更适宜用于常规表型检测这一方面。针对于胞内靶点而言，需要去确认抗体是不是能够承受固定破膜液。要以小批次的方式去对抗体滴定曲线进行测试，以此来确定最佳的使用浓度，这样做既能节省试剂同时又能够降低背景信号。要定期和厂家技术支撑进行沟通交流，从而获取最新批次的验证数据。
流式抗体使用注意事项
对于抗体而言，其保存以及稀释属于常见的风险要点，绝大多数的流式抗体应当在二至八摄氏度的环境下进行避光保存，严格禁止冷冻，不然荧光染料有可能沉淀并失去活性，在使用之前要轻柔地进行混匀之操作，且得避免剧烈地振荡从而而产生气泡，分装这么做才行呢可减少反复冻融所带来的效价下降情况，不过分装管应当是低吸附材质的，每次进行实验的时候都要设置同型对照以及单染对照，以此用来判断非特异性结合和补偿调节，这可是质控的基本要求呀。
染色时的步骤当中，有此这般的诸般指引，建议于冰上展开操作，同时要加入叠氮钠，以此来防止抗体内在化。洗涤的时候所使用的缓冲液，应含有适量的BSA或者FBS，目的在于降低背景方面的吸附情况。需要特别留意的是，荧光素对于光有所敏感，所以在整个过程当中都要进行避光处理。如果检测的是死细胞，那就加入核酸染料例如7 - AAD或者PI，以此来排除假阳性。到了最后，在上机之前要对样本进行过虑，去除其中的聚集物，防止堵塞流式仪的管路。还要记录每一个批次抗体的性能的表现情况，逐步去建立实验室内部的标准操作流程喔。
