分子生物学实验所用的快速PCR扩增试剂盒，提供了更为高效的扩增方案，它通过优化了酶体系以及缓冲条件，在此基础上在保障产物质量未受到影响的情形下，更是显著性地缩短了反应所需的时间，这类试剂盒特别契合那些有着想要高通量处置样本需求的实验室相关场景。
快速PCR试剂盒适合哪些实验场景
在基因表达水平分析方面，在物种鉴定方面，在环境样本中的微生物检测方面，快速PCR试剂盒能够极大程度地削减等待时间。比如说在食品真实性溯源工作当中，传统扩增耗费的时间大概是1.5小时，然而快速方案却能够压缩至40分钟之内完结，与此同时维持检测灵敏度不低于常规方法的95%。当科研人员筛选大量引物对的时候，快速试剂盒同样能够加快初步验证流程。
如何评估扩增效率的高低
判断扩增效率，要在同一模板梯度情形下，去对比Ct值或者产物产量，使用快速PCR试剂盒时，表示建议先设置标准曲线，也就是把模板按照10倍梯度去稀释，接着检测各个浓度点的扩增曲线，在理想状况下，每增加一个稀释梯度，Ct值会相差3.3左右，相对应的扩增效率是接近日乎100%，要是扩增效率低于90%或者高于110%，那么就需要检查引物设计或者退火温度是不是偏离试剂盒推荐范围，没错吧。
特异性问题怎样避免
有条带并非特异性的，或者是引物二聚体，这在快速扩增里是常见要面对的挑战。解决的办法包含这些：要优先去使用热启动Taq酶，这种酶能够在室温时把酶的活性封闭起来，一直到预变性的那个阶段；要把退火的温度提升二至五摄氏度，并且把退火的时间缩短至五秒；添加特异性增强剂，像TMAC或者甜菜碱。除此之外，每一批反应都应该设置没有模板的对照，要是对照呈现出扩增信号，那就需要重新对工作台以及移液器进行清洁。
操作步骤有哪些简化设计
普遍而言，市面售卖的快速PCR试剂盒采用的是2×预混液形式，只需要把引物、模板以及ddH2O加入进去，就能够进行上机操作。有一部分产品，是将热启动抗体跟dNTP、Mg2+提前混合在一起，并且去掉了对于冰上操作的要求。反应程序一般是这样的情况：先是98℃预变性30秒；接着是30到35个循环，每一个循环中98℃变性1秒，60℃退火以及延伸总共10秒；到最后72℃保持1分钟。这样一种三步合一的设计，使得总循环时间被控制在1小时以内。
