一种基于荧光信号累积以此实时监测 DNA 扩增的技术是荧光 PCR 检测，于食品病原筛查、环境微生物监测以及转基因成分鉴定等领域里有着极其广泛的应用，和传统 PCR 相比较而言得话，它不需要进行电泳就能够达成定量分析，其操作非常便捷并且灵敏度是极高的，要掌握它的核心原理以及操作细节呢，这是能够获得可靠数据的前提条件。
荧光PCR检测原理是什么
该技术借助荧光染料或者探针去标记特定产物，每当实现一个扩增循环，荧光强度就会同步地上升，仪器会实时采集荧光值并且生成扩增曲线，凭借阈值循环数也就是Ct值来反映初始模板量，Ct值跟目标核酸拷贝数成反比，因而能够精准地计算样本里目标基因的含量，整个过程大概需要1.5小时。
荧光PCR检测操作注意事项
提取样本的质量，会对检测的成败产生直接影响，推荐运用商品化的提取试剂盒，以此来避免出现交叉污染，加样之际要采用带滤芯的吸头，并且分区域进行操作，反应体系必须严格在冰上配制，酶材与引物要等到最后方能加入，每次实验均得设定阴性对照以及无模板对照，借由这个方式来排除气溶胶污染或者引物二聚体所带来的干扰。
荧光PCR检测结果如何分析
首先，要观察扩增曲线是不是呈现典型的“S”型，对于阴性对照而言，应该不存在起峰的情况，或者Ct值要大于35。对于待测样本来说，如果Ct值小于35，并且曲线指数期十分明显，那么就判定为阳性；要是Ct值处于35到40之间，而且重复孔保持一致，这种情况下建议进行复检；要是没有扩增曲线，或者Ct大于40，那就判定为阴性。另外，还需要检查熔解曲线（前提是使用染料法），以此来确保呈现单峰，不存在异构体。
