用于免疫检测的核心试剂一抗，其质量直接对实验结果的可靠性起着决定作用。于蛋白印迹、免疫组化等实验里，挑选合适的一抗并且正确进行使用，乃是获取有效数据的关键前提条件。
一抗怎么选
首要原则是依据目标蛋白的种属以及结构域去挑选一抗，查阅文献里同类型样本所运用的抗体克隆号，可为选择给予可靠参考，单克隆抗体特异性突出，适宜用以检测单一表位，多克隆抗体信号强烈，能够识别多个表位，实验应用类型同样决定着抗体选择，像免疫组化就要求抗体识别天然构象表位。
抗体验证要点
避免假阳性的有效办法，是借助多个独立批次去验证抗体特异性。检测时，使用基因敲除样本或者knockdown细胞裂解液，如此便能直观判断条带是不是非特异性结合。同时，要对比不同细胞系里的表达模式，以及组织中的表达模式，只有和已知表达数据保持一致，才表明抗体可靠。还建议查看产品说明书当中的验证数据图表。
一抗如何保存
分装冻存，乃是延长一抗使用寿命的常用方式，收到抗体后，依单次用量分配至低蛋白吸附管里，防止反复冻融致使效价降低，叠氮化钠能抑制细菌生长，不过会干扰某些检测体系，需提前确认，短期保存置于四度冰箱，长期保藏则需负二十度环境，且要做好标记。
实验操作细节
孵育的时间以及温度，是需要依据抗体说明书来予以优化的。室温之下进行一到两小时的孵育，这对于大多数实验而言是适用的，然而在四度的环境中过夜孵育，能够增强特异性信号。洗涤缓冲液里头吐温的浓度倘若过高，就会将弱结合抗体给洗脱，保持在百分之零点零五左右是比较适宜的。封闭液种类若是选择脱脂奶粉或者 BSA，会对背景强弱产生影响。
