周三下午三点十七分。
实验室里的空调坏掉了，我正坐在显微镜跟前，额头上的汗珠接连不断地啪嗒啪嗒地砸到目镜上呢眼前呈现的是经过第三次重新做的NAP染色结果却是依旧失败了阴性对照的细胞质当中棕色沉淀密密麻麻多得犹如秋天怎么扫都扫不完的落叶。
“又炸了。”我瘫在椅背上。
对面工位的师姐头都没抬：“洗几次？”
“说按要求洗三次啊。”
那位师姐，最终抬起了脑袋，看向我的目光，仿佛是在瞧着一个十足的蠢货，说道：“说明书里面所标示的‘按要求进行操作’，这种说明你真的能够去相信吗？”。
到底选定性还是定量
这是我跟NAP检测试剂盒的第一次正面交锋，输得一塌糊涂。
随后，我耗费了足足一周时间，逐个地查找了市面上所有的中性粒细胞碱性磷酸酶检测试剂盒。
原来这东西分两派。
有一种方式，需你于显微镜下逐个去数细胞，一旦细胞质里呈现出棕黑色颗粒便视作阳性，以100个细胞来计算积分，此为定性，亦称作染色法，另有一种是ELISA，将样本添加至酶标板里，经机器读取得出一个数值情形，这被叫做定量。
问题是——说明书不会告诉你：什么时候该数，什么时候该测。
我去问导师，导师说：“看你老板想看到什么。”等于没问。
不同种属能通用吗
去年，隔壁课题组有个叫小王的，贪图便宜买了可供个人使用的NAP检测试剂盒，打算用来检测小鼠样本。
结果呢？标准曲线跑出来像心电图。
我是在之后才知晓的，NAP于不同物种相互之间是存有结构方面差异的，人的试剂盒用来检测小鼠，抗体根本就无法识别出来。
那么，购买中性粒细胞碱性磷酸酶检测试剂盒时，第一步并非去比较价格，而是要考量种属。
人类，小鼠个体，大鼠个体，猪个体——各异的物种有着不一样的版本。要是选差了，那整盒的试剂便会直接报废掉。
灵敏度越高越好吗
喜欢自吹自擂的采购老张，老是炫耀他所购置的试剂盒，声称其具备超高的灵敏度，具体数值为0.033 ng/mL，仿佛能借此彰显自己的眼光独到。
听起来很厉害对吧？但问题是——灵敏度高不代表准确。
阈值才是关键。不同试剂盒的阳性判断标准不一样。
嗣后我终究弄清楚了，不论何种NAP检测试剂盒，于初次运用它之际，必定要开展预实验。说明书里的参数乃是理论数值，你的样本以及操作手法才是实际情形。
运输到底有多重要
这是我踩过最疼的坑。
那次，供应商发货是用泡沫箱加冰袋，送达时呢，那冰袋已然化成了处于常温状态的矿泉水。随后我把它打开瞧了瞧，便发现试剂瓶里的液体呈现出微微发黄的状况。
说明书上说2-8℃避光保存，全程冷链。
明明心里很不情愿，可我依旧鼓足勇气去做了那个实验。然而，空白孔的吸光度一下子就飙升到了0.3以上，背景呈现出一片杂乱无章的状态，所有的数据都失去了可用性。
后来我才知道，运输过程中反复冻融，抗体的活性会大幅下降。
于是乎，当下我购置物品之际，首先询问的并非价钱，而是：“你们冷链运输的方式是怎样的？”。
第一次做怎么不翻车
师妹小杨第一次独立做NAP染色，紧张得手都在抖。
她对着说明书，逐字逐句地念，加样之际，屏住呼吸，孵育之时，紧密盯着计时器。
结果呢？还是失败了。
我走过去看了一眼，“你洗涤液是直接从冰箱拿出来就用的？”
她点头。
“试剂用之前要放半个小时，平衡到室温。”
两眼发愣持续了两秒，紧接着那一双眼眶刹那间就红了起来。并非是由于委屈，而是源自懊恼，懊恼缘由是自己竟然没能瞧见说明书里的那一句话，懊恼原因是一整个下午的时间居然全部都付诸东流了。
我想起自己第一次也是这样。
每一位实验员，都有着一段充满血泪的过往经历，而NAP检测试剂盒，仅仅是那众多经历当中，最为令人刻骨铭心难以忘怀的其中一页篇章。
保存真的不能马虎
往年年末的时候，实验室着手清理冰箱，从中翻找出了一盒已经过期长达半年时间的NAP染色试剂盒。组内有人提出说把它扔掉算了，而实习生小陈则表示自己想要尝试一下。
他试了。
结果呢？细胞根本没染上色。
说明书上清清楚楚写着：2-8℃保存，未开封6个月有效期。
过期就是过期，没有例外。
阳性积分到底看什么
这是我被问得最多的问题，也是我最怕回答的问题。
那什么是NAP染色法，在做完这个染色法后，最终算出来的那个所谓“积分”，实际上主观性是厉害得很的。你在显微镜下面去数100个细胞，就拿这个细胞来说，它到底算不算阳性，再看那个细胞，它的颜色究竟够不够深，然而不同的人去看，结果可能是不一样的。
这是因为，两个人一起数会比较好，彼此之间能够相互核对。你的眼睛会感到累，会变得疲惫，会产生偏见。
阴性对照真的必要吗
很多人为了省试剂盒，不做阴性对照。
这是大忌。
阴性对照的意义是什么？是告诉你“实验系统本身没有问题”。
大刘有一回没进行阴性对照，跑出来的标准曲线看上去堪称完美，R²达到了三个九，他高兴得不得了，直接就使用了样本。
在后续才发觉，那一批试剂盒之中，用于检测的抗体出现了状况，而凭借这些抗体得出的样本数值通通都是虚假不实的。
样品溶血怎么办
这是NAP ELISA检测中特别容易被忽视的问题。
一种被称作溶血标本的情况，也就是你在进行离心操作之后所看到的上清液呈现出发红的状态，这种溶血标本是不能够被用于NAP检测的。
由于红细胞破裂之后会释放出内源性过氧化物酶，而这些物质会对检测信号造成干扰呐。
还有，脂肪血也不行，就是那种乳白色的血浆。
之所以要做预实验，是有原因的：对样本基质予以检测，需要确认不存在问题之后，才能够正式开展操作。
写到这里，我突然想说点什么。
的确，试剂盒仅仅是个工具而已，它既没办法说话，又不会发脾气，更不会由于你操作出现失误情况就对你进行责骂，呐。
可是，让人感到怪异的是，每一次，当你接连遭遇三天的失败，伫立在超净台跟前，神情木讷地发呆，一次又一次反复思索每一个环节究竟是哪儿出现了差错，最终发觉仅仅是由于忘掉将试剂调节至室温而已——。
那种感觉，就像被一个冰冷的塑料盒子上了狠狠一课。
它教你的，不光是免疫学原理，不光是ELISA操作规程。
它教你的，是精确、是耐心，是承认“我不够好”的勇气。
好了，不说了，我去数细胞了。
