那天凌晨两点的时候，实验室的灯管闪了几下，啊。我盯着凝胶成像仪的屏幕发现那它又一次变成空白了。
错啦却存在着一条浅浅淡淡的细长暗影且它好似幽灵，将其拍摄下来然后放大去瞧，依旧没法看明白。
这一事情，我已然做了三周年了。每一个步骤皆是正确无误的，温度以及时间精确到小数点之后仅一位数。然而，那个条带却始终未曾显现出来。
通用型PCR试剂盒使用技巧
我把那个当时正在被使用的盒子给翻找了出来，说明书上面所书写的内容显得颇为漂亮，有着“通用”以及“高兼容”这样的表述，似乎不管是什么都能够适用。
但你知道最搞笑的是啥？我换了三次样本后发现，模板是个坑。
那天，师兄路过，看了一眼我的体系，说道，“你这模板浓度实在是太高了，从而反倒抑制了扩增。”随后，他直接把模板浓度从1ul降到了0.2ul。
奇迹发生了，条带出来了。
这事我记到现在。通用的盒子也不万能，你的手才是关键。
通用型PCR试剂盒成分
箱子里头的物品究竟有啥不一样的地方呢？规模较大的工厂所生产的热启动的酶确实是很不错，然而那个价钱你是明白的呀！
便宜了一倍的国产货，不过得考量条件。我实验室抽屉之中囤放着好多不同牌子的试用装，每一回心里都欠缺底气。
曾有一回，听闻销售讲得神乎其神的，宣称他们的缓冲液抵抗杂质的能力极其出色。我取了一管高GC含量的去进行操作，最终的结果还算尚可，然而其性价比处于一般水平。
通用型PCR试剂盒原理
坦率来讲其原理着实简单，仅仅是酶所承担的任务易于开展。然而普遍适用的为了能够提升兼容性，其中添加了各种各样的助剂以及稳定剂。
我曾遇见过一位师弟，他拿到试剂盒后直接就进行操作，对于Tm值完全没理会，最后的结果是全部都是杂带，后来经过做梯度PCR，才寻找到适宜的温度，而缓冲液存在的微小差异，都极有可能对整体局面产生影响。
PCR试剂盒选购指南
师兄往昔传授给我一项经验，不要盲目迷信进口的，也不要贪图便宜去选择国产的。看那说明书当中的质检报告才是最为靠谱的。
有十几种我尝试摆弄过的牌子呢，天根推出的那种大包装，在性价比方面还算说得过去，生工所生产的预混液表现出较稳定的特性，然而存在不少情况是，那些小规模品牌所使用的盒子，与试剂之间具备兼容性问题的数量有很多呀。
所选取的微量样本，最好是标称“高灵敏度”的那种，日常进行常规PCR操作时，使用普通款便足够了。
对啦，讲个和主题无关的事儿。去年的冬天，我的冰箱老是出现状况，有一盒试剂反复地经历冷冻又融化，这样的情况发生了四五回。恰好那次着急要用这批试剂，结果呀，所有的试剂都没办法用了，都报废了。从那之后我再也不敢在这方面省钱了，该扔掉的时候就毫不犹豫地扔掉。
通用型PCR试剂盒操作
极端关键的，是——于冰面之上进行的操作。我在首次获取成功的那一回，特意着重留意起了此项细微之处。
慢慢地将其混合均匀，千万别进行剧烈的振荡行为。我见识过有人用力地摇晃，所产生的气泡极有可能致使酶失去活性。添加样品的顺序相当重要，首先加入水，接着加入Mix，随后加入模板以及引物，每一个管子都要轻柔地混合均匀之后再进行离心操作。
而每次都要特地设置阴性对照来进行相关操作，这笔开支是绝对不能节省的，不然一旦发生污染情况，却连是否存在污染都无法知晓，那么花费大半天时间所开展的工作就都变得毫无意义，白白浪费了精力。
罗列了好多，实际上所要表达的意思是，普遍使用的那个试剂盒并非能拯救你的物件，它仅仅是一种基础工具。
上个月，我耗费了一整个通宵，目的在于三种源自不同地方模板的扩增行为。我变动了四个退火温度，进行了三轮操作，最终才得以成功。在凌晨四点，当看到仪器所显示的数字以及条带的那一瞬间，我陡然觉得此前所有的折腾都是具备价值的。
那一刻觉得所有熬夜的血泪都值了。
