实验室中的灯，白得令人眼睛发花。我注视着培养箱里头那一团已显半死不活状态的东西，心中暗自骂了句粗口。又死掉了。这已然是本周的第三批兔原代细胞了。钱如同流水般不断消逝，时间同样被耗费进去了，然而结果究竟如何呢？只是得到了一堆废液。
小李，隔壁组的，探头过来，脸上笑嘻嘻的，说道：“王哥，又在跟兔子肝细胞较上劲了呀？”我懒得搭理他。他所使用的皆是细胞株，具备稳定的特性，易于培养，发表文章速度快。而我们呢？非要采用这种娇贵到极点的原代细胞。老师讲过，数据更趋近于体内的真实情形。可实际的情况是，它实在是太难伺候了！
兔原代细胞为什么这么容易死？
实际上打从起始，我同样认定究其为技术的难题。于网络之上展开教程搜索，那可是一找便有一大把，依照着去施行便是啦。获取组织，将其剪碎，予以消化，实施离心，重新进行悬置，而后铺垫平板。那些步骤背诵得极其熟练。然而成功的比率却始终无法提升上去。直至后来才细细思索清楚，发现问题就出在最初之时——那一只兔子。
你所使用的兔子，属于SPF级别的吗，年龄是多大，是刚刚成年的那种，还是属于年老的兔子，在获取组织之前禁食了多长时间，对这些细节，教程里面常常是简单提及一下，或者干脆就不进行提及了，然而它们恰恰就是关键所在，我曾经使用过从市场购买来的普通兔子，也使用过动物中心所提供的兔子，相应的状态有着极大差异，后者的价格更为昂贵，不过细胞活率却高出一大截，这笔钱，是节省不得的。
另外存在麻醉这一情况，要是剂量轻微，兔子就会挣扎，并且组织应激反应会十分剧烈，倘若剂量过重，便会直接对细胞活性产生影像，这个程度，得依靠自己逐步慢慢去尝试摸索才能得出，没有任何人能够告知你标准解答内容。
如何提高兔原代细胞的提取成功率？
坦诚地讲，器械，一定要预先制冷，整个过程都要在冰上面开展操作，这并非是一种建议给到你，而是绝对不能更改的准则。对于消化酶的挑选及其浓度，不要盲目地去相信文献当中所记载的内容，不然会吃苦头的。因为不同批次的酶，其活性存在着差别情形。我所采用的较为笨拙的办法是，先去实施一次预实验，从而摸索出一个大致的范围情况。
使消化所经历的时间，宁可短一些而不要长一些。间隔一定的时候便将其拿出来予以查看，在显微镜下进行视察。一旦察觉到边缘开始变得松散，那就赶快停止下来。离心时的转动速度同样如此，不要贪图速度快，动作要轻柔一点儿。因为细胞十分 brittle，经受不起过多地折磨。
不容忽视的是培养基，它极易被忽略。别急着使用完全培养基。在刚贴壁开头的那24小时，采用含血清量相对高一些的维持培养基，给细胞设定一个“缓冲期”。等细胞缓过劲来，铺开了，随后再更换生长培养基。
兔原代细胞培养常见问题怎么解决？
不长，先别怪细胞，看看培养箱，温度波动大不大，二氧化碳浓度准不准，湿度够不够？这些基础条件，往往是隐形杀手，我吃过亏，温控器坏了，低了0.5度，细胞长得像蜗牛那么慢。
这被污染了，这可是最为令人头疼的情况。除了要进行严格的无菌操作之外，还必须得留意支原体。常规的镜检是看不出来的，然而细胞的状态就是不正常，生长得缓慢，容易出现脱落的现象，如果定期使用支原体检测试剂盒去进行检查一下，心里才会感觉到踏实。
那次最为诡异，细胞原本生长状况良好，却意料之外地猛然大片大片呈现死亡。过后展开了一系列排查，历经一番周折，最终得出原来乃是血清批次出现问题之结论。新更换的这一批血清，其中极有可能存在某些成分并不恰当的情况。故而来讲，血清最好尽量采用同一批次，购买大包装规格的，将其冷冻储存起来，以便能够慢慢使用。
兔原代细胞能用来做什么实验？
当然不是仅仅放置着用来观赏的。我们会运用它去开展药物毒性的筛选工作。相较于永生化细胞系而言，它所呈现出的反应更加类似于活体动物，其数据具备更强的说服力。特别是像肝细胞、心肌细胞这类的。进行信号通路研究也可以的，不过周期比较短，要赶快抓住时间。大概传代两三代之后，其特性就会开始发生变化了。
也存在将其用于构建病毒感染模型的情况，然而，此情形对于细胞类型与状态的选择更为苛刻，并非所有的原代细胞都能接纳病毒的作用模式，毕竟这是有条件限制的。
养殖这个东西，感觉恰似养育小孩。你必须要懂得它，然而又不能够太过将它当作一回事。有时候，越发紧张，手部也就越会发抖，进而越容易出现差错。要把心态放平稳，该去做的那些步骤按照要求做到位，其余留下来的，就交给细胞自己。它是拥有自身的脾气的。
此时此刻，我注视着培养箱内那呈现出均匀铺开状态的、形态极为良好的细胞，随后最终舒缓了一口气。此时，窗外天边已然变黑变暗了。然而，我的内心却是明亮的。而这一抹明亮，是经由无数次失败才得以换来获取的。倘若你此刻也正在为了这个事情而发愁烦忧，那么期望我此番如同碎碎念这般的言语，能够助力帮你节省下一点时间，使得你能够减少少走一点弯路。科研这条道路路途，从一开始向来就不是容易轻松的。要是能够彼此之间互相搭一把手助力帮扶，总归一直都是好的有益的。
