说真的, 我要跟你讲个事儿, 这物件儿瞅着好像都没什么不一样, 然而差的那一小部分, 那可是有着极大的差距, 简直就是截然不同啊！
你觉得挑选PCR试剂盒能如同在超市选泡面那般, 瞅瞅牌子、摸摸价格就大功告成了吗? 简直太幼稚了。我见识过好多人买回去后才发觉——灵敏度, 没契合自身样本；特异性, 没契合自身样本；扩增效率, 也没契合自身样本。
为什么贵的反而不好用？
在实验室里, 那些经验丰富的老手都明白, 价格高昂的物品并不必然契合适合你的体系。在众多产品当中, 存在一些进口的大牌产品, 其包装呈现出高端大气上档次的模样, 然而人家所拥有的配方却是针对标准样本而实施优化的。倘若你手中所掌握的样本存在着些许杂质以及些许降解的情况, 那么它会直接停止运行, 向你展示其罢工的状态。相反的是, 存在某些看似不那么起眼的国产品牌, 它们专门针对复杂样本进行了相应的调整, 最终跑出来的曲线漂亮到了极致。
自己有一位朋友, 花费了三倍的价钱, 购买了某个知名品牌的试剂盒, 在检测自家那些特殊的样本的时候, 扩增曲线如同心电图一样, 波动得令人头皮发麻, 最终换了一款中端产品, 结果反而一次就通过了, 你说这气不气人?
有没有通用的“万能试剂盒”？
别做梦了。
每一款试剂盒, 都有着属于自身的特性。其中一些, 对于GC含量较高的区域, 表现出格外的敏感；另外一些, 针对低拷贝模板, 展现出特别的友好；还有一些, 在进行多重检测之际, 容易出现相互干扰的情况。倘若你要询问哪一个更为优良, 那么首先需要问问你自己的实验究竟是怎样的一种情形。
对从事病毒检测工作的而言, 需留意灵敏度得提升, 检测限越低才更为理想。针对做转基因鉴定的情况, 特异性必须要强, 切不可将背景噪声误当作信号。而进行基因分型时, 其稳定性乃是关键所在, 若是批次间存在较大差异, 相关数据都不敢往文章中放置。
怎么判断适不适合自己的实验？
看数据，看数据，还是看数据。
不要仅仅只盯着人家宣传页所写的参数, 那些参数是在最为理想的条件之下测量出来的, 就如同你购买手机时看宣传所给出的续航情况, 实际上使用起来能够达到宣传的七折便已经算是不错的了。
你所要查看的是, 于自身经常使用的仪器之上跑出来的实际得到的数据。上升曲线所具备的斜率, 还有荧光信号的基线平整度, 以及阴性对照的背景值, 这些方才是真实的。
认识一位做了十年PCR的老师傅, 他选试剂有个很朴素的习惯, 先拿自己最麻烦的那种样本去试跑一回, 能搞定其他样本的基本上都能搞定, 搞不定这个的话的, 即便其他样本再好那也是无用的。
储存和运输会不会影响性能？
问这问题的，说明你踩过坑。
有些试剂盒就对温度格外敏感, 在冷链运输期间时, 哪怕发生的温度波动幅度大了些, 其中的酶活性便会遭受损害, 你精心配好的体系, 最终跑出来的 Ct 值出现滞后状况, 样本原为阳性却变成阴性了, 这般冤枉的气我见识得太多了。
挑选之际再多询问一句, 发出疑问: 运输时的温度是否存有监控? 货物抵达之后要怎样去验收? 可靠的供应商均会拥有完备的质量控制流程。那些无法清晰说明的, 赶快更换到另外一家。
批次稳定性能不能信？
一句话：看供应商的品牌定位。
对于从事科研工作的人员而言, 批次稳定性对科研成果会产生影响；而对于从事检测工作的人员来讲, 批次稳定性与检测结果的有效性有着直接关联, 这是需要承担责任的。
我提议你先以小数量的方式去进行试用, 瞧瞧批次相互之间的数据所呈现出来的是否为一致的状态。千万别一开始就去囤积数量众多的一大堆, 倘若这其中的某一批次出现了问题, 那么你的项目就会宣告失败终止了。
最后说几句心里话
挑选PCR试剂盒这件事情, 真的并非那么神秘莫测, 然而也并非那么轻而易举。不要贪图价格低廉, 不要盲目迷信大品牌, 更不要将他人的经验毫无保留地直接套用到自己身上。
你得自己去试，去感受，去调整。
实验这行，没有捷径。但找对了工具，确实能少走不少弯路。
