不是所有“快”都靠谱
做PCR最怕什么？
等待, 等待着机器温度升高, 等待着酶能够反应过来, 等待着那个令人讨厌的循环彻底跑完。有时, 一个实验从上午开始一直做到天色变黑, 然而最终跑出来的条带却糊成了一团乱麻——那种感受, 恰似你排了两个小时的队去买奶茶, 可结果店员却把糖和盐混淆在了一起。
我懂。
所以呢, 当有那么一个人, 跟我讲起“有个快速PCR扩增试剂盒”这样一番话语的时候, 我的第一反应便是: 又出现了一个在那儿吹牛的。
究竟这些年来所见识过的“快速”类产品, 十个当中竟有八个是通过舍弃扩增效率来换取时间的。速度倒是快了, 然而产物却少得极其可怜, 要不然就是特异性差得完全离谱——你所扩增出来的东西跟你期望得到的东西, 或许根本不存在丝毫亲戚关联。
但它真的是快的
我得说，这个试剂盒让我愣了一下。
它的酶经过了改造, 据说其耐热性相较于常规的要高出一块儿。这意味着啥呢? 意味着你无需再小心翼翼地守着那个退火的温度, 无需再纠结是不是少了0.5度就全都不行了。它的变性时长短得出奇 —— 传统的是30秒, 而它只要10秒。延伸的速率也快, 正常情形下1kb需要30秒才能完成的事情, 它10秒就能完成。
30个循环下来，你算算省了多少时间？
1. 一个半小时吗? 不是的, 2. 常规PCR需要1.5至2小时, 3. 而它基本上是控制在40分钟以内的。4. 要是你做的是那些短的片段, 5. 恐怕半小时就可以收工了。
不过半小时而已呀, 你能够去泡上一杯茶, 刷不多不少几条短视频, 甚至倘若你有抽烟这个行为的话, 还可以前往楼下抽根烟, 等你返回来之时, 实验就早已经完成跑完了。
稳定性才是真东西
但说实话，快这个东西，有时候是双刃剑。
在那追求速度的过程里, 我目睹过太多人弄出的是乱七八糟的产物, 非特异性条带好似马路上顺序排列的栏杆, 你站到凝胶成像仪之前眼望那糊作一团的亮带, 并仅存一个念头: 今儿又白忙活一场徒劳无功了。
所以对快速试剂盒来说，最难的不是快，是又快又稳。
这个做过几次测试的试剂盒, 老实说, 头一回我是以心存疑虑的状态去操作的。当结果呈现之际, 我注视着那单独的一条条带长达十几秒, 接着又瞧了瞧旁边的标志物, 核验其并未出现跑歪的状况。随后我又更换了一对引物, 再次进行了一次操作。结果依旧稳定。
它所运用的技术我不再详细讲述下去了, （因为既使讲述出来了你也不见得会有兴趣）, 然而它所具备的酶有着很强的抵抗抑制的能力, 这意味着什么呢? 那就是在你提取模板并非极其干净的时候, 它也不容易出现失败的情况, 杂质、盐一类的离子, 甚至是一些常见的PCR抑制剂, 它都能够承受得住。
别踩这些坑
不过话说回来，任何试剂盒都有脾气。
这个试剂盒对于GC含量高的模板存在着些许挑剔之处, 你要是做的是那种GC含量超过65%的序列, 那么建议你对退火温度进行优化, 或者干脆加入一些DMSO进去, 切勿强行操作, 不要硬来。
它延伸的时间尽管不长, 然而别为了贪图速度就持续去压缩。厂家所给出的时间以及温度是经过验证的, 倘若你非要一意孤行, 出现问题可别怪试剂盒。
并且, 它所存在的酶浓度其设计是较为精妙的, 你在使用期间最好不要自己随意去增加量, 按照说明书执行就正确了。增加过多反而容易出现非特异性扩增的情况, 这样做是得失相当的做法。
谁更需要它？
说实话，不是所有人都需要快速PCR。
要是在你仅仅是偶尔去做一两个样品, 没有时间方面的紧迫感的情况之下, 常规试剂盒绝对是能够满足使用需求的。然而要是你属于那种一天之中需要处理几十个样品的人, 就像进行基因分型工作, 或者做病原检测, 又或者是成为那些深夜时间段还在实验室里和结果进行抗争较真如科研狗一般坚持的人, 这样的试剂盒确实是能够让你提前一个小时回到家中的。
一个小时。
可以让你陪着小孩去读一本绘本, 或者与朋友一同享受吃一顿夜宵的时光, 或者仅仅惬意地洗个澡, 然后躺在床上发呆一阵子。
实验是做不完的，但时间是你自己的。
别纠结了
我知道选试剂盒这件事很烦。
市面上存在着数量众多的产品, 每一款产品都将自身的优势吹嘘得极其夸张。价格, 速度, 灵敏度, 特异性, 稳定性……各种各样的参数罗列在你眼前, 你根本不晓得应当相信哪一个。
但有时候，你只需要试一次。
一次就行。
瞧瞧它可不可以于你那陈旧的PCR仪之上跑出美观的条带, 瞧瞧它会不会由于你不经意间多放置了些许模板便停止工作, 瞧瞧它究竟是不是确实能够在半小时之内给予你结果。
如果它做到了，你就知道该选谁了。
毕竟，实验不等人。
