我予以承认, 当首次听闻“快速PCR扩增试剂盒”这么个事物之际, 内心当中是持拒绝态度的。
诚然, PCR, 它可不就是一项陈旧的技术, 自大学实验室时期就开始做, 一直延续至今, 早就应该让人感到厌烦了。每一次去配制体系, 再去运行程序, 而后需要等待两三个小时, 当出结果之际, 实验室的灯恐怕都要关闭了。你居然跟我讲存在试剂盒能够在半小时内就完成搞定? 我的第一反应便是: 大概又是哪一家小厂在吹嘘夸大, 将简单的事情包装成为黑科技, 抬高价格去收割韭菜了。
但，生活就是喜欢打脸。
上一周, 隔壁组的小王, 使用某品牌的快速PCR扩增试剂盒, 做了一次紧急验证, 我路过的时候, 看到他电脑上的电泳图, 惊呆了。条带清晰得超乎想象, 背景干净, 跟跑了一整晚的结果毫无差别。我当场就羡慕嫉妒恨了, 真的是羡慕嫉妒恨。
于是，我开始了自己的“选盒之路”。
怎么这么快？原理靠谱吗？
讲真的, 我属于那种技术洁癖类型的人。当你跟我讲要快的时候, 我脑袋里头冒出来的最先一个问题是, 酶是不是足够稳定? 要是延伸时间被削减了, 产物会不会断掉。
后来查阅查阅了一些资料, 这下算是弄清楚了。快速PCR扩增试剂盒并非依靠魔法来达成效果, 实际乃是工程师们对聚合酶进行改造, 使其成为了“高速引擎”, 具体做法是添加了突变这种操作, 如此一来降低了酶对于抑制物的敏感性, 与此同时还提高了酶对模板的亲和力, 至于在升温或者降温之际, 此期间仪器尚未做出有效的反应, 酶已然开始快速地工作了。
说白了，就是效率翻倍。
然而仅仅光速快是没有实际效用的, 必须要稳定才可以。你有没有见识过那种呈现出扩增曲线弯曲得如同麻花一般形状的图? 不管怎样反正我是见识过的, 当时差点就把电脑给砸坏了。要是急速PCR扩增试剂盒也呈现出这般糟糕的情形, 那还不如返回到原来的老方法去使用, 起码在心里的时候会觉得踏实一些。
目标客户是谁？你和我都算
从普通的研究生，到实验室主管, 再到检测公司的技术员, 甚至是创业团队的研发人员。
其实大家的需求完全相同: 不要再让我加班了。我做过统计, 一天进行一次PCR, 从配样一直到看结果, 算上等待的时间, 差不多会耗费掉一整个完整的下午。在这中间你什么事情都干不了, 因为心里总是惦记着。痛苦吗? 痛苦。
那种被老板在下午四点半突然扔过来一个样品这般情况, 还要求说好今晚就得给出结果的时候，所带来的痛苦, 快速PCR扩增试剂盒就是用来解救它的。你说在那样的场景之下, 你心里慌不慌呢? 以前遇到这种状况我必定会慌, 可如今不一样了, 现在我不会慌了, 把试剂盒拿出来, 依照说明去进行加样操作, 设置一个短程序, 在六点之前绝对能够出图。
并且呢, 稳定性这个事物, 使用一回便会知晓。头一回启用之际, 我特地选取了一个已知DNA浓度的样本进行了一次梯度稀释, 然而扩增效率竟然比普通体系还要高出那么一小点。那时我感觉仿若捡到了宝贝。
到底怎么选？别光看价格
说真的，实验室买试剂，最怕踩坑。
好多价格低廉的物品, 于你使用之际会发觉, 或者是增效效率不甚高, 或者是重复性能欠佳, 或者便是说明书所写的尽皆为“最优情形”, 然而实际着手操作起来全然并非那般状况。
快速PCR扩增试剂盒亦是如此。我存有个习惯, 拿到新的产品后会先去做三件事情: 其一, 进行一次标准品的跑样, 查看Ct值的稳定状况；其二, 选取一个难以扩增的模板（好比高GC含量的或者具备二级结构的）来尝试；其三, 模拟日常的操作, 略微多添加或者少添加一些模板, 观察其耐受能力。
这三关过了的，才值得长期用。
眼下我正在使用的这款, 讲真, 其稳定性着实超乎预料。往昔使用普通试剂盒时, 时不时会有个别孔未能成功扩增出来, 进而还得进行补做。而快速PCR扩增试剂盒已经使用了将近两个月, 却一次都没有进行过补做。所得到的数据整齐得仿若经过尺子精确丈量那般。
缺点？当然有
别以为我是来吹的。
快速PCR扩增试剂盒存在着一个小问题, 即某些特别长片段的情况之下, 其扩增效率会出现下降。你所提到要有那样一种诉求, 也就是非要去扩增一个5kb以上的片段, 那么还是规规矩矩地更换为长片段专用的试剂盒吧。这种试剂盒主要侧重于中短片段, 在1kb以内的片段扩增非常理想。对于2kb的片段, 扩增效果也还不错。然而一旦片段长度再增加, 那就得看运气了。
此外, 它的售价必然会相较平常使用的试剂盒更为昂贵, 然而。你做一番计算去剖析其所节省下来的电费、仪器所占用的时间以及你个人所获取的加班费, 实际上是颇为合算有利的。时间等同于金钱呀, 各位兄弟们。
最后说点实在的
现在时刻, 在柜子里面, 我经常预备着两三种能够进行快速PCR扩增的试剂盒, 依据不一样的实验需求，交替着去使用它们。曾经有一回, 一个师弟向我发问, 你究竟是如何做出选择的呢?
我告诉他：别听广告，看数据。
他人所写之文以及所做推荐, 仅作参考之用。你运用自身的模板去运行一板, 如此一来对于好坏内心就可有底了。有一个称得上靠谱的快速PCR扩增试剂盒, 须得能让你感觉其中的“高速度”乃是额外赠予的, 而“高精准”方为其本身应有的特质。
至于那些还在犹豫要不要换的人，我只想说一句：早换早解脱。
真的，少加两小时的班，去吃顿好的，它不香吗？
