关于WT97细胞，我承认我头大过
讲真, 当首次碰到WT97人常染色体多囊肾病上皮细胞之际, 我的全部身心都处于一种懵懂的状态。
鉴于其名称着实冗长, 你连读三遍舌头都会打结, 那便是“WT97人常染色体多囊肾病上皮细胞” , 而后我索性称它为“小WT” , 又或者是“多囊小上皮”。
这种细胞, 可不是那种, 你随意投放些培养基, 它就能自顾自玩得极为畅快的类型。
它们娇弱、敏感, 动不动就耍性子, 不是不生长, 就是平白无故飘起来, 然后死掉给你看。
那段时间, 我着实被它搞得毫无脾气, 每日前往培养箱查看它, 恰似打开盲盒一般, 结果却开启了一个“全都死了”的选项。
它到底是什么东西？
说白了, WT97 这个东西呢, 它取自一个存有多囊肾病状况的人的身上, 是其肾小管上皮细胞。
那种叫多囊肾病的病症, 你们听闻过吧, 它属于一种特别令人厌烦的遗传病, 在肾上会生长出一个个的囊肿, 这些囊肿呈现出一堆一堆的状态, 它们就如同葡萄串那般, 会逐步地把正常的肾组织挤压到无法发挥作用, 进而无法正常工作。
这个细胞系就是用来研究这个病的。
它留存了多囊肾病所具备的基因特性, 因而科学家能够借助它去进行试药的操作, 查看相关通路的情况, 测定具体机制的效果。
不过呢, 我要跟你讲实在话, 大多数从事这个细胞相关工作的人, 起初实际上压根就没想着去了解它究竟有多厉害, 只是他们仅仅想弄清楚, 这个东西到底要用什么办法才能养活罢了。
为什么它那么难伺候？
你要是曾经养过平常的上皮细胞, 像HK - 2或者293T这样的, 那你会发觉人生是很美好的。
但WT97不是。
它长得慢，真的慢。
别的细胞48小时能铺满一瓶，WT97可能才长到三分之一。
并且它对于血清格外敏感, 你采用质量百分比为10%的胎牛血清, 它便如疯了一般毫无规律地疯长, 其形态也发生了改变, 好似气球一样鼓胀起来；若你采用5%的, 它又会处于饥饿状态, 过不了三天就开始大片大片地脱落。
我试过各种培养基搭配。
DMEM, F12, 混合而成的, 添加了各类因子的……随后查阅众多文献之后, 结果发觉他人运用的是特定的无血清培养基再加一堆补充剂。
但那个补充剂，贵得离谱，一瓶够我吃一周外卖。
所以我也想偷懒，自己配低血清的，结果细胞连一周都没撑到。
你没看错，它真会“自杀”
这细胞有个特别坑爹的特点——它特别容易贴壁，但贴得又不稳。
在我刚把它拿到之时, 依照常规的方法去进行换液操作, 先是将那旧的培养基给倒掉, 而后再轻轻地加入新的培养基。
结果第二天一看，板子底下一层白白的，全是飘起来的细胞尸体。
紧接着才弄明白, WT97这号人的贴壁它是假的性质, 它跟那种嘴上宣称“我挺好”的主儿一样, 心底里已然是崩溃状态——表面上死死地粘着, 实情是只要在换液的时候稍微给它冲一下, 它就会脱落。
故而我当下的换液操作仿若在拆解炸弹一般: 先是将近大半的旧培养基予以吸除, 仅仅留存一小点点, 并且随后从板壁缓缓添加新的, 其流速较之于输液还要缓慢。
整个过程得像伺候祖宗。
但你以为这样就行了？不。
它会因二氧化碳浓度不合标准, 因培养箱温度存在波动, 就连开门次数过多, 也会给你脸色瞧, 给出相应反应。
关于传代，我也踩过坑
传代就更不用说了。
我一开始用胰酶消化，按上皮细胞的标准时间——2分钟。
结果细胞全部缩拢成为了小小的球状物体了, 无论怎样吹都无法将其分散开, 在强行把它们分散开之后, 细胞的存活比率不到百分之四十。
随后经过一番查看, 得知WT97对于胰酶有着格外的敏感性, 它在所需要的胰酶浓度的要求上更低, 并且在时间方面要将其把控在45秒直至1分钟的范围之内。
对，你没看错，45秒。
你手稍微慢一点，它就没了。
现今, 每当胰酶抵达, 即刻按下计时器, 于40秒之时连忙拍打板子, 再借助培养基予以终止, 而后轻柔地进行吹打动作, 务必不可用力, 否则又会致使一片死亡。
而且传代比例也不能太高，1:2是最合适的。
你进行一比三的传代, 下一周你去进行查看, 细胞呈现出又衰老又萎缩的状态, 如同连续熬夜三天的打工人那般。
它为什么长得这么慢？
我之前一直以为是自己养得不好。
后来, 看了一篇论文, 才发觉, WT97自身的倍增时间, 就格外长, 大概是普通上皮细胞的两倍左右。
再者, 多囊肾病所关联的细胞, 在其内部, 代谢原本就处于异常状态, 线粒体功能存在问题, 能量代谢有问题, 凋亡信号通路同样有问题。
这意味着什么？
意味着它不是不想长，而是它天生就“长不快”。
所以你急也没用。
现当下我养着它, 心态已然放平了, 每日都去瞧它一回, 只要它没飘起来、没死去、没发生变形, 那便算是好日子了。
倘若它生长得略微快那么一点点, 我甚至于会满心欢喜一整天, ——听起来是不是特别卑微呀, 然而从事细胞研究的人都清楚, 这可是实实在在的。
它对实验条件也很挑
做实验的时候，WT97更让人崩溃。
你想着去做个CCK8来测增殖吧, 它的吸光度始终是很低的, 缘由在于细胞的数量原本就不多, 你若是种得少了便不会有信号, 倘若种得多了它又生长得不好。
假定你打算进行transwell此操作, 其具备的穿膜能力呈现出极为薄弱的态势, 哪怕你耐心等待长达48小时之久, 穿过数量也仅仅只有寥寥几个而已。
你打算做免疫荧光吧, 其形态原本就略微呈圆形, 并非像其他上皮细胞那般舒展, 你所拍摄出来的照片一直是“看上去不太对劲”。
这些问题，文献里很少写。
你只能自己试，一遍遍试，试到血压升高、怀疑人生。
但慢慢你会发现，它就是这么个性格。
你没办法强求它如同癌细胞那般疯狂地生长, 也不能够指望它好似正常细胞一样规规矩矩。
它夹在中间，带着疾病基因的背景，怎么都不太顺。
但说真的，它挺可爱
我养它养了快半年。
目前渐渐地弄清楚了它的习性, 虽说它常常会给我带来“意外之喜”, 不过我已然不像最初那般慌乱无措了。
我晓得它所需的内容, 清楚它惧怕的事物, 明白何时应当进行换液操作, 知晓何时不该对其有所触动。
有时, 瞅见它于显微镜之下缓缓舒展, 进而转变为那般典型的上皮铺路石样形态, 我便会觉着颇具成就感呢。
毕竟，你征服了一株不好惹的细胞。
而且说到底，它背后代表着那么多多囊肾病患者。
要是你把它照料得妥善了 , 或许就表明着某项实验达成了 , 某种机制弄明白了 , 某种药物有前景了。
想到这里，那些被它折腾的日子，好像也值了。
最后说一句
如果你也在养WT97，或者正准备养它，我想跟你说——
别怕它难。
它只是有点慢、有点娇、有点怪。
但你只要多给它一点耐心，它会给你回报的。
那一些飘起来着的细胞, 那一些没信号的板子, 那一些白做了需要重来的实验, 全都是你于跟它进行磨合。
等你们磨合好了，它会成为你最靠谱的伙伴。
反正，我已经跟它和解了。
不知道你到哪一步了？
