真的存在“万能”的PCR试剂盒吗？
老实说，我一开始听到“通用型”三个字，心里是打鼓的。
搞实验那种人, 有谁没被“通用”这两个字给坑过? 买回来之后却发觉“通”不了自身所拥有的样本类型, 又或者扩增效率跟说明书里吹嘘所说的根本完全是两码事。我明白那种感受, 真的是明白。
所以今天聊聊这个，不吹不黑。
什么叫“通用”？是噱头还是真本事？
业内对“通用型”的定义其实挺模糊的。
有的厂家所讲的“通用”, 意味着它对于各种各样的样本类型均具备兼容性, 诸如血液、组织、唾液、拭子, 把这些扔入其中都能够运行。另有厂家所提到的“通用”, 指的是其酶体系历经优化, 能够与市面上大部分品牌的试剂仪器相匹配。
你问哪一种更重要？都重要，但要看你在什么场景下用。
我所见识到的最为离谱的情况, 乃是有一个实验室购置了宣称“通用”的试剂盒, 然而随后更换了一台不同品牌的荧光定量PCR仪, 结果Ct值一下子就漂移了3个循环。试问这能称作通用吗? 这分明就是在碰运气啊。
不同场景下，通用型试剂盒到底该怎么选？
如果你在研发阶段，最怕什么？
最怕——试了半天，结果不稳定。
处于研发阶段的样本种类繁杂多样, 你说不定今儿处理的是小鼠之尾巴, 明儿开展的是细胞裂解液相关操作, 而后天进行的又是环境水样的处理工作。在这样的时候, 通用型PCR试剂盒所具备的真正优势在于, 其体系宽容程度颇高。
也就是说, 你那样本里微微携带着些许杂质, 而且抑制剂的浓度处于偏高的状态, 然而它却依旧能够实现稳定的扩增, 在这个时候, 千万别仅仅只是去看价格, 要多多去瞅瞅它的抗抑制能力方面的数据。
如果你在批量检测，最看重什么？
一个字：快。
进行批量检测之际, 最为让人厌烦的状况是出现“卡壳”, 操作步骤所需数量越少越为理想, 预混液越是简易越为合意, 通用型PCR试剂盒设定倘若能够达成“一步加样且上机运转”这般情形, 那便堪称极为美妙。
还有需要留意的一点在于, 在批量检测的情形之下, 试剂盒的批间稳定性相较其他任何方面都更为关键。你针对第一批试剂以及第二批试剂去检测同一个样本, 其Ct值之间的差值不得超过0.5, 不然你该如何开展质控工作呢?
如果你是新手实验室，刚起步
我格外感同身受那种心境, 设备数量不多, 预算处于有限状态, 况且样本类型繁杂多样, 在这种情形下购置一个通用型试剂盒, 实际上而言即为购入一份 “容错率”。
有关容错率具体体现在何处究竟是体现在哪, 就体现在其对于不同品牌仪器所具备的兼容性方面。不是仅仅只看它所写的“兼容ABI、Bio-Rad、Roche”就行的, 你应当去询问技术支撑才行的: 在使用XX仪器的时候, 退火温度是不是必须得调整, 是不是需要添加额外的优化步骤才行?
好的技术支撑，比试剂盒本身还贵。
通用的代价，你心里要有数
说实话，凡事都有代价。
那些为了能够兼容不一样的样本、不一样的仪器、不一样的体系而设计的通用型PCR试剂盒, 其特异性有可能比不上经过专门优化的窄谱试剂盒。在极为极端的情形之下, 低拷贝模板的检出率会稍微低那么一点点。
然而这并非缺点, 这乃是一种取舍, 举例来说, 将瑞士军刀与菜刀相比较以便切菜, 必定是比不过的, 可你能够随身携带十把菜刀出门吗?
别迷信“进口”这两个字
有太多实验室, 我都见过, 只要一听说进口试剂盒, 就两眼放光。然而, 那进口的“通用型”, 真的就更适合你了吗?
不一定。
通常情况下进口试剂盒的优化场景, 常常所涉及的是国外的标准样本类型以及标准操作流程, 然而你所拥有的样本它有可能源自于农村养殖户那里, 或者是来自环境采样点, 又或者是属于保存不当的旧标本, 对于这些场景而言, 进口试剂盒并没有过多地去进行过相关测试操作。
相反, 许多国产试剂盒在这些年取得了极大进步, 特别是针对本土复杂样本的适应性方面进行了优化, 且做得十分扎实, 价格还便宜了许多。
买之前，问自己三个问题
1. 我主要用什么类型的样本？
2. 我用什么品牌的仪器？
3. 我最怕出什么问题——假阴性？假阳性？还是Ct值波动？
考虑明白这三个问题之后, 再去翻阅查看说明书, 向技术支撑进行询问。不要仅仅因为看了两篇推文就做出下单的行为, 真真切切的。
最后说一句实话
通用型的PCR试剂盒, 向来都不是那所谓的“万能钥匙”。它其实更类似于一把有着多种功能的“螺丝刀”, 它能够拧动大部分的螺丝, 然而一旦碰到特别特殊的情况时, 那就还是必须得去更换专用的工具才可以。
选对了，它是你的省心神器。选错了，它就是你的实验噩梦。
希望你不是那个做梦的人。
