通用DNA纯化回收试剂盒

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

商品属性：

产品名称	规格	货号
通用DNA纯化回收试剂盒	100次	P-PR1026

 

保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
产品介绍：
在高离序盐存在的情况下，DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.独特的吸附柱设计，消除了液体残留及污染，并且洗脱体积最低可至 5μl。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖 DNA 回收、PCR 产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用。
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测 pH 值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.可回收 50bp-25kb 片段，每个吸附柱可吸附 DNA 量为 5μg。
适用范围：
适用于琼脂糖凝胶 DNA 回收、PCR 反应产物纯化回收、酶切产物 DNA 片段纯化回收、探针标记后纯化回收、DNA 样品浓缩等。
注意事项: 1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
2.储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
4.溶胶液/结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.回收纯化的 DNA 片段一般在 50bp 到 25kb 之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。回收 DNA 的量和起始 DNA 的量、洗脱体积、DNA 片段大小有关，一般为 5μg。100bp-5kb 的 DNA 片段，回收率可高达 85％-95％。大于 10kb 的 DNA片段，可减少洗脱体积，提高浓度。
6.切胶回收时，紫外灯观察对 DNA 片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
7.pH 值≤7.5 时，吸附膜吸附 DNA 的效率最高。如果切下来的凝胶中含有电泳缓冲液太多，造成溶胶后溶胶液 pH 偏高，会导致回收率降低。溶胶后，如果溶胶液依旧保持黄色，说明 pH 正常；如果变成橘红色或者淡紫色，说明 pH 偏高，可在胶充分溶解后加 5-10μl 3M 醋酸钠（pH5.2）将 pH 值调到 5-7（黄色）。
8.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA 片段应该保存在-20℃。DNA 片段如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
自备试剂：无水乙醇
操作步骤：
提示：第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1.琼脂糖凝胶 DNA 回收：
1）在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的 DNA 条带切下，尽量切除不含 DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
2）将切下的含有 DNA 条带凝胶放入 1.5ml 或 2ml 离心管。
3）加 500μl 体积溶胶/结合液 DB。（胶块与溶胶/结合液比例 1:1 至 1:5，回收率不受影响。）
4）50℃水浴放置 10min（或直至胶完全溶解）。期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
5）将上一步所得溶液加入微量 DNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置 1min，12,000rpm 离心 1min，倒掉收集管中的废液。
6）加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 1min，弃掉废液。
7）重复操作步骤 6。
8）将微量 DNA 吸附柱放回空收集管中，12,000rpm 离心 1min，尽量去除漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9）取出微量 DNA 吸附柱，放入一个干净的 1.5ml 离心管中，室温放置数分钟。
10）在吸附膜的中间部位滴加洗脱缓冲液 EB 10μl（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），12,000rpm 离心 1min。如果需要较多量 DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心 1min。(注意：洗脱体积一般为 10μl，根据样品浓度，洗脱体积 5μl 至 50μl 均可。)
2.PCR 产物或者酶切片段等 DNA 纯化：
1）每 100μl PCR 扩增后体系或者酶切后体系加入 500μl 溶胶/结合液 DB，充分混匀。（产物与溶胶/结合液比例 1:1 至 1:5，回收率不受影响。）
2）将上一步所得溶液加入微量 DNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置1min，12,000rpm 离心 1min，倒掉收集管中的废液。
3）从此步骤开始和琼脂糖凝胶 DNA 回收的操作步骤 6-10 完全一致，请参见琼脂糖凝胶 DNA 回收的操作步骤 6-10。